• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        【专题讨论】dominant negative及在蛋白质功能研究中的应用

        丁香园论坛

        4261
        想和大家讨论一下关于dominant negative的问题。

        首先,什么是dominant negative
        在网上查到的解释多为:显性抑制---虽然多数的突变都隐性的,可是在遗传学的实验上,也曾观察到显性的突变,如果这突变会抑制或破坏某一正常的功能,就称之为“显性抑制”。
        在实验中给野生型表达或转入无功能的基因或目的蛋白无功能类似物,观察是否会影响原来也具有正常功能的基因或蛋白的作用。一般用于验证实验的准确性。

        就我的理解,dominant negative指的是某种蛋白的突变,而该突变导致了该基因的失活。说得再通俗点,就是蛋白A发挥正常功能,但当蛋白A发生dominant negative突变,或者说在细胞内存在蛋白A的dominant negative突变后,蛋白A就失去了功能。另外,只要存在dominant negative突变了,那么即使仍然还有正常的蛋白A,也不发挥作用了。

        那么这种突变在研究蛋白质功能方面就具有了很重要的作用了。说白了,就是一种基因Knockout的方法。
        研究某基因功能,通常的方法包括:
        1。给与特定刺激,基因表达量改变;
        2。Knockout或Knockdown该基因,再给与刺激,功能消失;
        3。Rescue或Overexpression

        其中第二步Knockout是很重要的一步。以前大多研究采用基因双交换的方法将该基因替换为某些报告基因比如抗性基因,使得该基因敲除,但是操作麻烦,而且如果敲掉的基因内部存在调控其它基因的元件则必须再做互补试验确证;新出现的RNAi技术具有很好的应用前景,操作简便,但是也存在着问题,许多细节还不是很清楚,另外RNAi大多为Knockdown而不是Knockout,也就是仍然会有少量基因表达,也是个问题。

        因此dominant negative也是一种可以考虑的knockout的补充方法。这种方法并不是现在才有的,已经应用了很长时间,但是没有流行起来,究其原因,可能由于大多数基因并不具有天然的dominant negative的形式,如果去筛选突变将是很大的工作量(虽然如果得到一种dominant negative的话,这种基因的研究工作将会非常简便且明确,但是很少有人去尝试。。。。)。那么有没有更简便的方法去得到dominant negative?

        因此想和大家讨论一下关于dominant negative的应用的问题,欢迎大家发表意见!
        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序