蛋白质技术

信号通路，只有一个目的：将细胞的外部信号转换成细胞的内部变化。不管是胰岛素，还是异亮氨酸，抗原还是肾上腺素，它们的终极目的总是如出一则：对转录活性的改变。这些对于转录活性的影响来自于转录因子与基因的调控区域：如启动子、增强子、沉默子等结合达到的。经典的凝胶迁移滞后试验（theelectrophoreticmobilityshiftassay）已经成为证明某种蛋白能与特定的短基因序列结合的有力方法手段。但是凝胶迁 ...

Ref. Seed and Sheen Gene 67 271-277 (1988) Normal reaction is Chloramphenicol + Acetyl-CoA -> Acetylchloramphenicol Assay uses butyryl-CoA (more hydrophobic) 14C-Cm+ Bu-CoA->Bu-14C-Cm Km (Cm) 1 ...

alimama_pid="mm_10043573_137377_1822161"; alimama_titlecolor="FF9900"; alimama_descolor ="552c55"; alimama_bgcolor="f7f7f7"; alimama_bordercolor="f7f7f7"; alimama_linkcolor="552c55"; ...

Terminal Deoxynucleotidyl Transferase (TdT) is an enzyme that catalyzes the repetitive addition of mononucleotides from dNTPs to the terminal 3´-OH of a DNA initiator accompanied b ...

Material/reagents: • 2X binding buffer: 20 mM Tris pH 7.5 100 mM NaCl 2 mM EDTA ...

There are multiple variations to this protocol, but we find that this one works well in all cases we tested.Reagents: 5X EMSA Buffer: 50mM HEPES (pH 7.9)375 mM KCl12.5 mM MgCl20.5 mM EDTA5 mM DTT15% Ficoll32 P-labeled oligonucleotide probepolydI/dC: 1 mg/ml in TEBSA: 10 mg/ml in TE5% Polyacrylamide gel (30 ...

alimama_pid="mm_10043573_137377_1822161"; alimama_titlecolor="FF9900"; alimama_descolor ="552c55"; alimama_bgcolor="f7f7f7"; alimama_bordercolor="f7f ...

Wash one 0.45um Millipore nitrocellulose filter (Cat# HAWP01300) in 1ml 0.4M KOH for 1 min; wash in 3ml dH2 O for >1min. Assemble filter apparatus: white plastic bottom support/funnel nitrocellulos ...

Marian Price-Carter, 9/7/00Day 1 : Start overnight cultures in assay medium.Negative control : cells lacking b -galactosidase, such as LT2; positive control : cells with high enzyme activity.Day 2 : Dilute cells 1/100 in fresh medium, grow to mid-log.1 Prepare solutions: Z buffer, phosphate buf ...

在基因表达研究中，研究者比较注意选择合适的表达载体和宿主系统，而往往忽视基因本身是否与载体和宿主系统为最佳匹配这样一个实质性问题。基因的最佳化表达可以通过对基因的重新设计和合成来实现，如消除稀有密码子而利用最佳化密码子，二级结构最小化，调整GC含量等。以下就密码子最佳化、翻译终止效率和真核细胞中异源蛋白表达的问题加以说明。 密码子最佳化（codon optimization） 遗传密码有64种， ...

选择材料及预处理 　　以蛋白质和结构与功能为基础，从分子水平上认识生命现象，已经成为现代生物学发展的主要方向，研究蛋白质，首先要得到高度纯化并具有生物活性的目的物质。蛋白质的制备工作涉及物理、化学和生物等各方面知识，但基本原理不外乎两方面。一是得用混合物中几个组分分配率的差别，把它们分配到可用机械方法分离的两个或几个物相中，如盐析，有机溶剂提取，层析和结晶等；二是将混合物置于单一物相中，通过物理力 ...

选择材料及预处理 　　以蛋白质和结构与功能为基础，从分子水平上认识生命现象，已经成为现代生物学发展的主要方向，研究蛋白质，首先要得到高度纯化并具有生物活性的目的物质。蛋白质的制备工作涉及物理、化学和生物等各方面知识，但基本原理不外乎两方面。一是得用混合物中几个组分分配率的差别，把它们分配到可用机械方法分离的两个或几个物相中，如盐析，有机溶剂提取，层析和结晶等；二是将混合物置于单一物相中，通过物理 ...

一、实验目的与原理 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时，它的迁移取决于它所带电荷以及分子大小和形状等因素。1967年Shapiro等人发现，如果在聚丙烯酰胺系统中加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠(SDS)大多数蛋白质能与SDS按一定比例结合，即每克蛋白质结合1.4g的SDS－复合物都带上相同密度的负电荷，它的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量，因而消除了蛋白质原有的电荷差别，使蛋白质分子电泳的迁移率主要 ...

蛋白质是生物体的重要组成部分，在现代生物制药领域有着重要的作用，本文介绍了现代生物分离技术反胶束萃取、双水相萃取和电泳在多肽蛋白质分离中的应用和现状。

Protein表达是一个非常复杂的过程，因此很难预测表达的蛋白是否是可溶性的、包涵体形式还是部分降解的。为了预防各种可能的困难条件，在重组蛋白上导入两种Tag可以提供获得高纯度均质蛋白的灵活性。 蛋白含有两种不同亲和纯化Tag的重要原因： 纯化全长的蛋白 获得最高纯化的蛋白 适合变性或生理条件下纯化 优化的操作过程，可以直接从培养基中纯化蛋白 与Strep-tag®配合最有效的是6x ...

Characterization of Phosphopeptides Using a Combination of Immobilized Metal Ion Affinity Media and Direct Analysis by MALDI-TOF-MS INTRODUCTION Phosphoproteins and peptides can be bound with high spe ...