蛋白质技术

在过去的一年里，随着双向电泳、质谱以及不同研究程序核心技术的改进，蛋白质组学保持着持续快速的进步。完全注释的蛋白质组学数据库现在在一些领域已经出现了，并为系统研究提供了一个平台，在临床应用诸如心血管和肿瘤学中尤其有发展前途。大规模定量研究，在功能和敏感性上能与基因表达所达到的程度相媲美，因而在蛋白质水平上的研究也正变为现实。 简介 如果90年代是基因组的十年，新世纪的头十年将成为蛋白质组学的十年 ...

The human and bovine 14-3-3 eta protein mRNAs are highly conserved Evolutionary conservation of the 14-3-3 protein Expression and structural analysis of 14-3-3 proteins Crystal structure of the zeta i ...

1.如果诱饵蛋白对酵母细胞是有毒的，该怎么办？ 在某些情况下，在液体培养基中培养不好的菌珠可以在固体培养基上生长得很好。首先重悬克隆于1ml的SD/–Trp，接着将重悬液平铺于5 个100-mm的SD/–Trp平板，在30℃下温浴，直至平板上的克隆相互粘在一起。用5ml 0.5X YPDA刮下每块板上的克隆，并收集到一管中，这样就可以使用这个细胞重悬液进行正常的杂交反应。 ...

Preparation of Dialysis tubing 1)Boil the tubing on a sitr plate (preferably in the hood)in a 4L volume of 2% (w/v)sodium bicarbonate and 1mM EDTA pH 8.0 2)Rise the tubing in distilled water thoroughl ...

Solutions 1.1 M Acetic Acid 2.Buffer A Homogenization 10 mM MOPS- 40 ml of 2M stock solution 8 liters 4 mM EDTA- 160ml of 0.2M stock solution 1 mM DTundefined - 8ml of 1M stock solution 0.1 mM PMSundefined - 14ml o ...

研究者们在分离到某一基因后，要对其编码蛋白质进行研究最理所当然的工作就是表达――即：有目的性地合成外源基因产物。在重组DNA技术的发展早期，人们认为在基因的前面有一个强启动子和一个起始密码子就足以在大肠杆菌中获得很好的表达。随后，认识到获得有效的翻译所需的条件要复杂得多，除了要有强启动子和起始密码子外，良好的表达尚需编码目的蛋白的mRNA中含有核糖体结合位点，表达水平受密码子喜好程度的影响，也受编 ...

蛋白质 等电点 鲑精蛋白 鲱精蛋白 鲟精蛋白 胸腺组蛋白 ...

1. Wash adherent cells twice in the dish or flask with ice-cold PBS and drain off PBS. Wash non-adherent cells in PBS and centrifuge at 800 to 1000 rpm in a table-top centrifuge for 5 minutes to pelle ...

一、生物大分子色谱纯化方法的选择思路 通常在做纯化前对自己的目标物质特性了解越多对纯化将会越有利，如果不太了解，也可以通过电泳知道目标物质和杂质的情况，找到一种简单的鉴定方法，此外在纯化前必须先建立可靠的活性测定的方法。如果是未知的蛋白，那么通常可以有几种简单的摸索： 1.凝胶过滤色谱。这个方法很常用，但是效率不高，对低浓度的样品没有富集作用，上样量小。 2.离子交换色谱。此法很常用，但是样品必须 ...

蛋白质是一种生物大分子，基本上是由20种氨基酸以肽键连接成肽链。肽键连接成肽链称为蛋白质的一级结构。不同蛋白质其肽链的长度不同，肽链中不同氨基酸的组成和排列顺序也各不相同。肽链在空间卷曲折叠成为特定的三维空间结构，包括二级结构和三级结构二个主要层次。有的蛋白质由多条肽链组成，每条肽链称为亚基，亚基之间又有特定的空间关系，称为蛋白质的四级结构。所以蛋白质分子有非常特定的复杂的空间结构。一般认为，蛋白 ...

三阶段纯化策略 纯化问题所涉及的具体步骤最终取决于样品的性质。但也有共同可参考的阶段 捕获阶段：目标是澄清、浓缩和稳定目标蛋白。 中度纯化阶段：目标是除去大多数大量杂质，如其它蛋白、核酸、内毒素和病毒等。 精制阶段：除去残余的痕量杂质和必须去除的杂质。 分离方法的选择 根据蛋白质的特殊性质采用不同的分离方法： 蛋白质 ...

在生化制备中，沉淀主要用于浓缩目的，或用于除去留在液相或沉淀在固相中的非必要成分。在生化制备中常用的有以下几种沉淀方法和沉淀剂： 1．盐析法 多用于各种蛋白质和酶的分离纯化。 2．有机溶剂沉淀法 多用于生物小分子、多糖及核酸产品的分离纯化，有时也用于蛋白质沉淀。 3．等电点沉淀法 用于氨基酸、蛋白质及其它两性物质的沉淀。但此法单独应用较少，多与其它方法结合使用。 4．非离子多聚体沉淀法 用于分离生 ...

9M Urea2.5mM EDTA2.5mM EGTA1% DTE4% CHAPS make 10ml and aliquot 10x1mlfreeze at -70℃ Lysate preparation wash the cells 2x with PBS wash the cells 1x with 10mM Tris250mM Sucrose lyse the cells with 100 ...

凝胶层析又称为分子筛层析或凝胶过滤。具有分子筛作用的物质很多，如浮石、琼脂、琼脂糖、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、葡聚糖凝胶等。以葡聚糖凝胶应用最广，商品名是sephadex型号很多，从G10到G200，它的主要应用范围是：①分级分离各种抗原与抗体；②去掉复合物中的小分子物质。如除盐、荧光素和游离的放射性同位素以及水解的蛋白质碎片；③分析血清中的免疫复合物；④分子量的测定。 （一）原理 凝胶是一种多孔性的 ...

Research Tools: Synthetic Biology and Protein Engineering Research Goals: (1)Improve the performance the key proteinssuch as turn-over numberKmsubstrate promiscuitythermostabilityinhibitionetc.by prot ...

This sample preparation method is a direct replacement for the dried droplet technique. It produces more uniform samples than the dried-droplet technique and the crystals are better adhered to the sam ...

References: Watterson et al.(1980)J Biol Chem 255:962-75. Charbonneau et al.(1979)Biochem Biophys Res Commun 90:1039-47. Extraction of Calmodulin Solutions: 1.1 N NH4OH stored at room temperature. 2.1 ...

型号 排阻的下限 （ Mr ） 分级分离的范围 ...

Proteome Research: ConceptsTechnology and Application (Principles and Practice) By Marc R.Wilkins (Editor)Ron D.Appel (Editor)Keith L.Williams (Editor)Denis F.Hochstrasser (Editor) Publisher: Springer ...

Italics indicate optional steps especially useful for the analysis of untested proteins. GROWTH AND HARVESTING OF BACTERIA Add 100μl ampicillin to 100 ml LB.Inoculate and grow overnight. In the mo ...