蛋白质技术

本实验的目的是学会各种蛋白质含量的测定方法。了解各种测定方法的基本原理和优缺点。 蛋白质含量测定法，是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一。目前常用的有四种古老的经典方法，即定氮法，双缩尿法(Biuret法)、Folin-酚试剂法(Lowry法)和紫外吸收法。另外还有一种近十年才普遍使用起来的新的测定法，即考马斯亮蓝法(Bradford法)。其中Bradford法和Lowry法灵敏度最高，比 ...

在基因表达研究中，研究者比较注意选择合适的表达载体和宿主系统，而往往忽视基因本身是否与载体和宿主系统为最佳匹配这样一个实质性问题。基因的最佳化表达可以通过对基因的重新设计和合成来实现，如消除稀有密码子而利用最佳化密码子，二级结构最小化，调整GC含量等。以下就密码子最佳化、翻译终止效率和真核细胞中异源蛋白表达的问题加以说明。 密码子最佳化（codon optimization） 遗传密码有64种，但 ...

一、材料与仪器 30%丙烯酰胺溶液；1.5mol/L Tris-HCl分离胶缓冲液，pH8.8；1.0mol/L Tris-HCl浓缩胶缓冲液，pH6.8；电泳缓冲液，pH8.3；10%SDS溶液；10%过硫酸铵溶液；样品处理液；染色液；脱色液；电泳玻璃板，电泳电源架，电泳槽，电泳仪等；蛋白Mark。 二、方法与步骤 1)分离胶和浓缩胶配制 按下表比例分别配制分离胶和浓缩胶： 表2-7：聚丙烯酰胺 ...

新颖的去污剂混合物 即时可用的ZOOM® 2D Protein Solubilizers是1.1X溶液由溶解在去离子、0.2微米过滤的7.7M尿素(urea)和2.2M硫脲(thiourea)中的特有的去污剂混合物组成。 通过这些混合物你将: 节省时间以及消除制备错误--无需称量混合固体试剂和离液剂去离子。 获得可重复结果-ZOOM® 2D Protein Solubilizers ...

GST fusion protein purification GST融合蛋白纯化 John MundyInstitute of Molecular BiologyCopenhagenDenmark http://www.arabidopsis.org/info/Protocols_Mundy2.jsp#gst 1)grow 20ml cells O/N37℃ dilute 50X into pr ...

1)Run protein gel. Set up blot: 2)Prepare two tupperware containersone with dH2O and one with 1/2X Transfer Buffer (TB). 3)Remove one glass plate from the gel by twisting a spacer between the plates.T ...

一、植物组织蛋白质提取方法 1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。 2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）。 3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃ 4、提取上清液，样品制备完成。 蛋白质提取液：300ml 1、1Mtris-HCl（pH8）45ml 2、甘油（Gly ...

原理 GST 纯化系统是利用GST （glutathione-S-transferase ）融合蛋白与固定的谷胱甘肽（GSH）通过硫键共价亲和，通过GSH交换洗脱的原理来进行纯化 。1ml树脂大约可结合5-8 mg融合蛋白，并可反复使用数次。试剂u IPTG（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷） 2g IPTG 溶解入10ml 水，过滤除菌，分装，-20℃保存。u Lysis bu ...

1）大量养晶法（bulk crystallization）：若急着养出单晶，则将纯化之蛋白质溶液加入固体盐类或饱和盐液，直到溶液中出现乳白混浊色，离心后把上清液（suppernatant）放置数天至数周，有可能养出单晶。 （2）批次养晶法（batch method）:若发现加入蛋白质的沉淀剂和盐类等化学药品，在浓度c1产生沉淀，浓度cn为液体，则在c1至cn之间细分成一串浓度c1>c2> ...

These protocols should yield enough cytosol and organelles for 1-200 MT/Organelle motility assays. Solutions and Reagents • Freshly removed or flash frozen rat liver • PBS •Homogeniz ...

Sample preparation and solubilization are crucial factors for the overall performance of the 2-D PAGE technique.Protein complexes and aggregates should be completely disrupted in order to avoid appear ...

二级结构是指多肽链借助于氢键沿一维方向排列成具有周期性的结构的构象，是多肽链局部的空间结构（构象），主要有α－螺旋、β－折叠、β－转角等几种形式，它们是构成蛋白质高级结构的基本要素。 α－螺旋(α－helix)是蛋白质中最常见最典型含量最丰富的二级结构元件.在α螺旋中，每 个螺旋周期包含 3.6 个氨基酸残基，残基侧链伸向外侧，同 ...

原创：Chromatography weixingui@263.net， 推荐书籍：《蛋白纯化与实验鉴定指南》、《生物工程下游技术》、《酶工程》、《酶制剂工业》 1）我现在手头有个融合蛋白，纯化的时候用助溶剂溶解后做了GST亲和层析，之后用蛋白酶切割后却发现目的蛋白没有活性。 请问有哪些可能会出现这种原因？怎么解决？测过基因序列，没有问题。细胞破碎后，融合蛋白在沉淀里，我用助溶剂提取后，可以用GS ...

Cleavage Sites Table for Fusion Proteins： PROTEASE COMPANY Protease Capture Thrombin Leu-Val-Pro-Arg�Gly-Ser ...

Purification of Gcn4 James FishburnHahn Lab March 2006 Gcn4 constructs are cloned into the pET21(a)vector and have a 6-His tag expressed at the N-terminus Gcn4 is expressed and purified from BL21(DE3) ...

蛋白 酶 已知对应的抑制剂 蛋白 酶 已知对应的抑制剂 ...

人体内真正发挥作用的是蛋白质，蛋白质扮演着构筑生命大厦的“砖块”角色，随着破译生命密码的人类基因组 计划进入尾声，一个以蛋白质和药物基因学为研究重点的后基因组 时代已经拉开序幕，蛋白质将是今后的重点研究方向之一。然而，蛋白质的分离和鉴定非常费时，目前测定蛋白质的技术远远落后于破译基因组 的工具，最好的实验室每天只能分离和识别出100种蛋白质。据估计，人体内可能有几十万种蛋白 ...

•减少样品的复杂程度，同时富集低丰度蛋白 •使用低费用格式的mini-gel，获得高分辨率的结果 •快速而简单的无油2-D电泳 •质谱兼容染色，检测微克到纳克级水平蛋白 使用ZOOM® Benchtop Proteomics™ System能够进行简单而容易的蛋白 分离，能够以有效的mini-gel格式，进行第一和第二向凝胶电泳。这个系 ...

Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。 本文主要通过以下几个方面来详细地介绍一下Western Blot技术: 一、原理 二、分类 i.放射自显影 ii.底物化学发光ECL iii.底物荧光ECF iv.底物DAB呈色 三、主要试剂 四、主要步骤 五、 ...

第一章 绪 论 1．蛋白质组： 一个基因组内所有基因表达的全部蛋白质。的定义有什么不足。 蛋白质组：不同类型的细胞或同一个细胞在不同的活动，状态（时空）下，蛋白质组的蛋白质种类构成却很不一样。因此，蛋白质组的定义：一个基因组内所有基因表达的全部蛋白质。定义从字面上容易理解，但在实际中却很成问题。 2．如何理解从基因组－蛋白质组是一个复杂而漫长的里程。 ①目前基因注释的方法还有较高的出错率，尤其对那 ...