蛋白质技术

德国科学家最新研究发现，蝾螈体内存在着一种奇特的酶，这种酶可让其肢体和器官重生。科学家认为，人工合成出这种酶，有望让失去了四肢以及某些器官的人再生出新的四肢和器官。

北京大学和海南医学院联合对肝癌细胞特异性标志物甲胎蛋白（AFP）进行长时间的研究，发现AFP具有抑制PTEN的生物学功能，导致肝癌细胞耐受全反式维甲酸诱导的凋亡，这是AFP新功能的发现。

蛋白质的分子设计是蛋白质工程的一个重要方面。设计分成三类： 一是小范围改造，就是对已知结构的蛋白质进行少数几个残基的替换，来研究和改善蛋白质的性质和功能； 二是较大程度的改造，是对来源于不同蛋白质的结构域进行拼接组装，期望转移相应的功能； 三是蛋白质从头设计。所谓蛋白质从头设计就是给定一个目标三维结构，要求找出与已知顺序无明显同源，能折叠成目标结 ...

蛋白质结构的推测与测定一级结构测定 蛋白质一级结构的测定又称蛋白质顺序分析，其基本方法是：①应用化学裂解法和蛋白酶水解法将多肽链专一性裂解。②逐一测定每个纯化的小肽段的顺序。③根据肽段氨基酸顺序中的重叠区确定小肽段的排列次序。④完成整条多肽链的顺序分析。 尽管蛋白质顺序分析已经自动化，但仍然耗时、复杂并且昂贵。重组DNA技术出现后，人们可以从cDNA或基因序列直接推导出蛋白质的氨基酸 ...

蛋白质改造为新的突变蛋白质即蛋白质工程 蛋白质工程是以蛋白质结构功能关系的知识为基础，通过周密的分子设计，把蛋白质改造为合乎人类需要的新的突变蛋白质。蛋白质工程已经成为生命科学中的一个重要分支，它是在基因重组技术、生物化学、分子生物学、分子遗传学等学科的基础之上，融合了蛋白质晶体学、蛋白质动力学、蛋白质化学和计算机辅助设计等多学科而发展起来的新兴研究领域。其内容主要有两个方面： ① ...

蛋白质的分子结构分析蛋白质工程的核心内容之一就是收集大量的蛋白质分子结构的信息，以便建立结构功能之间关系的数据库，为蛋白质结构与功能之间关系的理论研究奠定基础。 蛋白质的一级结构是指多肽链的氨基酸残基的排列顺序。 蛋白质二级结构是指多肽链借助于氢键沿一维方向排列成具有周期性的结构的构象，是多肽链局部的空间结构(构象)，主要有。螺旋、p折叠、p转角和无规则卷曲结构等几种形式。 ...

蛋白质与蛋白质组分析生物信息学 生物信息学的主要目的之一是理解蛋白质的氨基酸序列和三维结构之间的关系。一旦关系的规律被确定，就能根据氨基酸序列预测蛋白质的空间结构。但是，序列与结构之间的关系并不简单。以序列和结构为基础对蛋白质进行分类已取得一些进展，这些信息对蛋白质结构模型的构建很重要。 预测二级结构的算法中使用了多种计算方法，其中包括神经网络、离散态模型、隐马尔可夫模型、最近邻分 ...

蛋白质凝胶电泳的操作方法【材料与试剂】（1）2×SDS凝胶加样缓冲液（2）聚丙烯酰胺凝胶电泳槽和电泳仪（3）加样器和吸头等（4）水浴锅【操作方法】（1） 把上述处理的样品按1:1（V/V）与2×SDS凝胶加样缓冲液混合，100℃加热3分钟，使蛋白质变性；（2） 取出变性蛋白质，立即放于冰上。样品如粘稠可进行超声对DNA进行剪切，以最大功率处理0.5～2分钟应能有效地将裂解液粘稠 ...

以PVDF膜为固相载体的半干转印法

蛋白质凝胶电泳凝胶的制备【材料与试剂】（1）30%的丙烯酰胺：分别称取29g 丙烯酰胺，1g NN-亚甲双丙烯酰胺加温热的去离子水60ml，加热至37℃溶解，补加水至终体积为100ml过滤，即配成30%（w/v）丙烯酰胺贮存溶液。丙烯酰胺和双丙烯酰胺在贮存过程中缓慢转变为丙烯酸和双丙烯酸，这一脱氨基反应是光催化或碱催化，故溶液的pH值不超过7.0，应置于棕色瓶中4℃保存。（2）10%十二烷基硫酸 ...

常用蛋白酶蛋 白 酶分 类作 用 位 点已知抑制物氨基肽酶金属蛋白酶带有自由氨基的L-氨基酸氨基末端；不能分解由X-Pro、-D或-Q组成的肽键2，2�双吡啶，1，10-菲咯啉菠箩蛋白酶巯基蛋白酶无特异性a2巨球蛋白，TPCK TLCK 烷化剂羧肽酶A锌金属蛋白酶带有自由氨基酸的L-氨基酸羧基端；不能分解R、P或羟脯氨酸EDTA EGTA羧肽酶B锌金属蛋白酶KR羧基端EDTA EGTA碱性氨基酸 ...

蛋白质定量（一）Bradford法 该方法用于大多数蛋白质定量是相当精确的，特别是用于小分子多肽定量。如核糖核酸酶或溶菌酶等。但是，去污剂的浓度超过0.2%则影响定量结果。如TritonX-100SDSNP-40等。（1）Bradford染液配制：将100mg考马斯亮蓝溶于50 ml 95%的乙醇中，加入100ml 浓磷 酸，然后，用双蒸水补充至200ml，放4C至少6个月。这种染液也可从B ...

Bcl-2原癌基因的检测 Bcl-2原癌基因被认为是哺乳动物细胞凋亡过程中的负调控剂。本法采用鼠抗Bcl-2单克隆抗体，可通过免疫组化或免疫细胞化学的方法用于检测组织或细胞中的Bcl-2，或者通过Western blots检测细胞粗提物。【样本来源】（1） 离心细胞；（2） 细胞涂片、冰冻或石蜡包埋组织切片；（3） 细胞粗提物。【材料与试剂】（1） 鼠抗 ...

野生型p53蛋白可以通过诱导凋亡而抑制肿瘤的生长，突变型p53基因丧失了诱导细胞凋亡的能力，从而增强了细胞的恶性转化能力，而且在恶性肿瘤常可检测出突变型p53基因。p53蛋白也可能参与化疗药物诱导的细胞凋亡。本法运用一步夹心免疫法，定量检测野生型或突变型p53蛋白。【样本来源】（1） 人、鼠、兔的组织切片（2） 肿瘤细胞株【材料与试剂】（1） 过 ...

蛋白质组分析中的初步分离 在分析质谱产生的二维图谱上的蛋白质斑点时，看起来似乎只有通常含量比较高的蛋白质(编码偏倚指数大于0．2)才能彻底被鉴定出来。因而，二维胶上的斑点数量不能代表可以分析的全部表达的基因的数量或种类。Gygi等(2000)曾经计算过，在二维作图的早期阶段，如果只装入40ug酵母溶出产物，那么只有丰度超过至少51 000拷贝(每个细胞)的多肽才能被检测到。如果起始的蛋白质 ...

蛋白质组学同位素标记的亲和标签方法 Aebersold和其合作者开发了一种同时对蛋白质组进行鉴定和相对定量的方法，即一种包含在无胶蛋白质组流程中的同位素标记技术(Gygi等，1999)。他们提出使用一种试剂，这种试剂能够使两种同位素在形式上具有明显的区别，即同位素标记的亲和标签(isotopicallycodedaffinitytag，ICAT)试剂。ICAT试剂的结构包含一个生物素头部、 ...

蛋白质组学表面增强激光解吸电离方法 表面增强激光解吸电离(surface-enhanced laser desorption／ionization，SELDl)技术基于MALDI技术，利用了其测量部分。SELDI涉及一个在特殊化学表面的亲和俘获过程，随后利用激光解吸电离探测进行质量分析(Merchant和Weinberger，2000)。 SELDI过程可以描述为4个部分。 ...

DNA结台蛋白的分离及克隆 上面简单介绍了鉴定DNA结合元件所结合蛋白质的最常用的方法，对蛋白质更深入的分析应对其相应的基因进行克隆。基因克隆后，就可以通过基因突变判断蛋白质和某生物过程的关系，确定负责蛋白质活性的结构域，分析该蛋白质的作用机制和调控模式。 (一)蛋白质纯化法和序列分析法 克隆DNA结合蛋白，首选蛋白质纯化法，在得到氨基酸序列后，设计PCR简并引物，用于扩增基因片 ...

蛋白质胶内酶解 从二维凝胶电泳到基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(MALDI―TOF―MS)需要有一个胶后处理系统，包括凝胶的图像扫描和分析、蛋白质斑点切割、酶解和MALDI靶上点样等步骤，其自动化程度的高低是蛋白质组研究能否达到高通量、高灵敏度和高准确性的关键步骤之一。 快速银染的蛋白质点进行胶上酶解的主要步骤如下。 (1)清洗和脱色：将蛋白质点用Ettan切胶仪(A ...

药用纳米粒的制备 20世纪80～90年代，人们对药物缓释系统的研究主要着眼于增加药物利用率和降低材料的毒副作用。早期的纳米、微米粒子主要由聚烷基氰基丙烯酸盐合成。微米粒子因其体积过大，不能从肠腔进入体内淋巴循环系统而不适用于口服药物。另一方面，纳米载药粒子因噬菌作用导致其降解速率过快，影响其在静脉内的吸收和利用。近年来，人们通过对纳米粒子的表面修饰而解决了上述问题。纳米粒由于其特有的优点， ...