蛋白质技术

相关专题 &NBSp; 电泳切胶注意事项： 1、电泳的buffer和gel都是新制的，切胶的台子清理干净，刀片最好洗净灭菌，总之一句话就是保证切下的带没有外源DNA污染。 2、切胶是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。为了减少胶的体积，可以用相对比较薄的胶来做，只要够点样即可，也可采用薄而宽的梳子来跑胶。 3、关于防护，在一般有机玻璃后就 ...

相关专题 重组DNA技术工具酶 琼脂糖凝胶电泳是分子实验的基础技术，电泳迁移速率主要受到一些因素影响DNA的分子大小、DNA分子的构象、琼脂糖浓度、嵌入染料的存在、电源电压、离子强度影响。 实验原理 一、DNA的限制性内切酶酶切分析 限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上并切割双链DNA。它可 ...

相关专题 1%的RNA琼脂糖凝胶电泳可以用来检测RNA的完整性，本实验的主要目的是熟悉植物总RNA非变性胶电泳操作原理和操作方法与步骤。 一、实验目的 掌握植物总RNA非变性胶电泳的原理和方法。 二、实验原理 RNA电泳可以在变性及非变性两种条件下进行。非变性电泳使用1.0%--1.4%的凝胶，不同的RNA条带也能分开，但无法判断其分子量。 ...

相关专题 单细胞凝胶电泳(又名彗星实验)的操作流程主要包括单细胞悬液的制备、凝胶板制备、细胞裂解与解旋、电泳与中和、染色和观察等步骤。本文总结了单细胞凝胶电泳操作步骤和注意事项，希望对初入实验的同学有帮助。 1、分离制备单细胞悬液： (1)体外培养的细胞株：用胰酶消化，最后用PBS悬浮吹打成单细胞悬液，细胞要计数，具体的量我前边已经说过。 ...

相关专题 SDS-PAGE凝胶制备属于实验室最常规的操作了，刚开始做蛋白实验总是在找凝胶配制实验中所用试剂的配方，这里总结了分离胶、浓缩胶、分离胶和浓缩胶缓冲液、考马斯亮蓝染液、样品缓冲液、电泳缓冲液等配方。 1. 分离胶(12%) ...

相关专题 变性梯度凝胶电泳主要分离原理是利用DNA链的熔解性质达到分离目的，低熔点和高熔点的DNA局部解链的程度不同，分子的迁移速率不通过，进而分离。 一、实验原理 变性梯度凝胶电泳(DGGE)是一种根据DNA片段的熔解性质而使之分离的凝胶系统。核酸的双螺旋结构在一定条件下可以解链，称之为变性。核酸50%发生变性时的温度称为熔解温度(Tm) ...

相关专题 DNA跑完电泳后，需要进行带型分析，电泳图上的带型可能有出现许多状况。那么如何根据DNA电泳带型结果调整自己的实验呢?这里简单的做个介绍。 DNA电泳需要进行带型分析，在实验过程中常会发现所得的带型出现在这样那样的问题。在此，对DNA带型做了相应的分析。带型原因分析解决办法弱带或无带上样的DNA量不够增加DNA的上样量，聚丙烯酰 ...

相关专题 本文讲述了国内电泳技术水平与国外电泳技术水平的差距以及讲述了国内电泳技术提高的展望及前景。 电泳仪 中国在电泳技术临床应用上与国外相比，存在一定的差距。若按照国外实验室标准，国内三级甲等、三级乙等医院均需配备自动电泳仪，但目前国内不少三级甲等医院仍没有使用这类设备。电泳项目国内一般也只以血清蛋白为主，而国外所做项目包括血清蛋白、 ...

相关专题 本文介绍了琼脂糖凝胶电泳检测DNA的设备、材料以及详细的实验步骤，也讲述了琼脂凝胶的特性供广大读者参考。 琼脂糖凝胶电泳是分离鉴定和纯化DNA片段的常用方法。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应，DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。由于糖磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数量的双链DN ...

相关专题 本文介绍了毛细管电泳的兴起与发展、毛细管电泳基本原理。毛细管电泳于1981年由Jorgenson等人创立至今已发展达到国际先进水平。 毛细管电泳仪 一、 毛细管电泳的兴起与发展 毛细管电泳(capillary electrophoresis CE)，又称高效毛细管电泳(HPCE)是近年来发展最快的分析化学研究领域之一.1981年 ...

相关专题 本文讲述了聚丙烯酰凝胶电泳(PAGE)技术的一些催化剂的具体介绍以及聚丙烯酰凝胶电泳(PAGE)技术的注意事项。 聚丙烯酰凝胶电泳(PAGE)是根据被分离物质所带来的电的荷多少及其分 子大小、形状的不同，在电场的作用下，产生不同的移动速度而分离的方法。 它具有电泳和分子筛的双重作用。 1、聚丙烯酰胺的聚合丙烯酰胺单体和交联剂N1 ...

相关专题 本文介绍了血清蛋白质电泳技术的基本原理、实验的试剂仪器和操作过程以及影响电泳结果的主要因素，还就讲述血清蛋白质电泳技术的临床意义了供广大读者参考。 血清蛋白质电泳仪 【 实验原理】 1. 电泳的基本原理 带电颗粒在电场中向着与其电性相反方向移动的现象称为电泳。 电泳时不同的带电粒子在同一电场中泳动速度不同。带电颗粒 ( 球形分子 ...

光様：今天诸事不顺啊啊啊啊啊ヽ(｀Д′#)? ???!!下午做PCR制样的时候老是加错东西导致我制样就花了一个小时，最后盖EP管盖子的时候直接把整个管搞翻了又得重新加= =好不容易P完丢去跑电泳到现在电泳仪突然接触不良根本就跑不动而且buffer似乎被人换掉了……TAE这种无色透明的东西谁看得出来啦摔！ 毛阿毛阿毛阿毛：这个跑电泳吧，就跟生孩子一样，等待的 ...

最近在做原核表达，包涵体。以前也做过，但经验不多。从园子里也学到不少。一点失败的教训以及纯化过程中的体会，贴出来与大家共享，同时希望得到同行们的指正。1. 首先介绍一下背景。载体是novagen公司的pET22b，Amp抗性。菌株是Invitrogen的BL21 star DE3，是一个蛋白降解酶突变菌株，也就是说是一种优化表达菌株。2. 第一次失败 ...

我做了很久的western blot，尤其是phospho-抗体，可以算是达人了。我根据自己的经验，对磷酸化蛋白之western blot提出以下建议，供刚入门的同仁参考： 1.一定要在lysis buffer中加入蛋白酶抑制剂，还要加入一定量的磷酸酶抑制剂，否则即使band压出来也会很浅，结果也不可信。 2.加一抗后最好4度过夜，保证抗体有充分的结合时间。因为磷酸化的蛋白只占总的蛋白量的极少部 ...

目前，蛋白质组技术已深入到生命科学研究中的各个领域，其技术发展日新月异。对于多数研究者而言，蛋白质组技术最为引人注目的优点，在于能够大规模寻找不同研究对象之间的差异蛋白质，进而发掘它们相关的功能关系和分子机制。差异蛋白质的发现是蛋白质组学研究的核心之一；定量蛋白质分析则是差异蛋白质研究的基石。然而，作为一个年轻学科，蛋白质组技术还正处在快速发展的阶段。一个显而易见的事实是，没有一项定量蛋白质组分 ...

选择材料及预处理　　以蛋白质和结构与功能为基础，从分子水平上认识生命现象，已经成为现代生物学发展的主要方向，研究蛋白质，首先要得到高度纯化并具有生物活性的目的物质。蛋白质的制备工作涉及物理、化学和生物等各方面知识，但基本原理不外乎两方面。一是得用混合物中几个组分分配率的差别，把它们分配到可用机械方法分离的两个或几个物相中，如盐析，有机溶剂提取，层析和结晶等；二是将混合物置于单一物相中，通过物理力场 ...

根据问题的类型主要分成以下几类：1. 谨言以下资料权作参考，请勿盲目模仿2. 针对样品的常见问题B. 做线粒体膜UCP2蛋白的Western Blot （以下简写成Western Blot），提取线粒体后冻存（未加蛋白酶抑制剂），用的博士德的一抗，开始还有点痕迹，现在越来越差，上样量已加到120μg，换了个santa cloz的一抗仍不行。是什么原因？蛋白酶抑制剂单加PMSF行吗？解答：怀疑 ...

蛋白质沉淀的概念：蛋白质分子凝聚从溶液中析出的现象称为蛋白质沉淀(precipitation)，变性蛋白质一般易于沉淀，但也可不变性而使蛋白质沉淀，在一定条件下，变性的蛋白质也可不发生沉淀。定性分析：蛋白质所形成的亲水胶体颗粒具有两种稳定因素，即颗粒表面的水化层和电荷。若无外加条件，不致互相凝集。然而除掉这两个稳定因素(如调节溶液pH至等电点和加入脱水剂)蛋白质便容易凝集析出。如将蛋白质溶液pH调 ...

1 蛋白质含量测定法2 WESTERN PROTOCOL3 Western免疫印迹（Western Blot）4 蛋白质沉淀法5 蛋白质提取的方法总汇 1 蛋白质含量测定法本实验的目的是学会各种蛋白质含量的测定方法。了解各种测定方法的基本原理和优缺点。蛋白质含量测定法，是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一。目前常用的有四种古老的经典方法，即定氮法，双缩尿法（Biuret法）、Folin－酚 ...