蛋白质技术

相关专题 Northern 杂交(Northern blotting)　　 1979年，J.C.Alwine等提出：将电泳凝胶中的RNA转移到叠氮化的或其他化学修饰的活性滤纸上，通过共价交联作用使它们结合，因其方法同Southern杂交十分相似，故称之为Northern杂交。　　 1 原理　　 Northern杂交是利用DNA可以与RNA进 ...

相关专题 Western Blot技术专题 与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学 ...

相关专题 Northern Blot I. Electrophoresis clean gel box with NaOH and/or SDS 2 hours to overnight rinse with water prepare Agarose gel solution 1 x MOPS H2O to 95 % of endv ...

相关专题 Western Blot技术专题 一.实验步骤 1. 组织块称重 2. 利用液氮、研钵粉碎组织块 3. 加入RIPA缓冲液(每克组织3 ml RIPA)，PMSF(每克组织30μl，10 mg/ml PMSF)，利用Polytron进一步匀浆(15000转/分1分钟)维持4℃ 4. 加入PMSF(每克组织30μl，10 ...

相关专题 Western Blot技术专题 1.制胶及上样： (1)配制12%SDS-Page分离胶，混匀后注入边条厚度为2mm的两块洁净玻璃板间，其上加一薄层异丙醇，室温下静置至凝固。 (2)待分离胶完全聚合后，倾去其上的水层，以吸水纸吸净残余液体，插入加样梳，缓缓加入浓缩胶，使其充满加样梳间的空隙，室温下静置。待胶完全聚合。 ...

相关专题 Western Blot技术专题LOWRY法蛋白定量专题 A. Folin-phenol(lowry method)定量法 此法以Biuret方法反应为基础发展而起，因此会严重干扰Biuret测定方法的因子都会影响此测定法的准确度。这些干扰因子包括：含-CS-NH2，-CH2-NH2，-CRH-NH2，-CH2-NH-CHNH2-C ...

相关专题 1.确定抗生素作用的最佳浓度：不同的细胞株对各种抗生素有不同的敏感性，因此在筛选前要做预试验，确定抗生素对所选择细胞的最低作用浓度。 ① 提前24 小时在96 孔板或24 孔板中接种细胞8 孔，接种量以第二天长成25%单层为宜，置CO2 孵箱中37℃培养过夜。 ② 将培养液换成含抗生素的培养基， 抗生素浓度按梯度递增0(50 10 ...

相关专题 western blot中膜的选择是实验成功的关键点，Western blot实验中一般可以选择硝酸纤维素膜(NC) 和PVDF膜，那NC膜和PVDF膜有什么区别呢？怎样才能选择最恰当的杂交膜进行Western blot实验呢？ NC膜 PVDF膜 尼龙膜的特点 解答：尼龙膜是较理想的核酸固相支持物，有多种类型;硝酸纤维素膜(NC ...

相关专题 Blotting with BSA 1. Blot in 5% mile/ 1X PBST (or 1X TBST) --60'/Rt 2. Wash 2X for 5' in 1XPBST 3. 10Ab in 1% BSA/1X PBST --60'/Rt 4. Wash PBST 15' th ...

相关专题 蛋白Marker可分为：一、未预染的Marker即宽分子量蛋白标准、高分子量蛋白标准以及低分子量蛋白标准;二、预染的Marker即单色预染和多色预染。 在western blot过程中，分子量Marker就像个螺丝钉一样没虽然是个小细节，然而就是这样一个小细节对实验结果有着不可忽视的作用。这个 Western Blot参照家族的 ...

相关专题 Western免疫印迹(western blot)是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。 本文主要通过以下几个方面来详细地介绍一下Western Blot技术: 一、原理 二、 分类 i.放射自显影 ii.底物化学发光ECLiii.底 ...

相关专题 问：我现在在养细胞，然后收细胞抽蛋白以及提RNA用，我想先多收点细胞冻着。想问一下怎样收集细胞，有具体的流程吗? 我是这样做的： 1、将细胞消化吹打后转移至离心管离心 2、倒去上清，加1 mlPBS打匀后转移至1.5 ml EP管 3、离心12000 rpm 2 min (不知道大家这里用多少转速，有讲究吗?) 4、倒去上清，我是 ...

相关专题 生物实验中的封闭剂 Q：western blot 中脱脂奶粉封闭的是哪些蛋白?原理是什么? A：脱脂奶粉中主要是乳清蛋白和酪蛋白。原理就是用非抗原的蛋白去封闭膜，避免标记抗体固定在膜上引起背景增高。 Q：请问封闭液和抗体稀释液用BSA和脱脂奶粉有什么区别呢? 有人跟我说奶粉的封闭效果更好些，但是通常只能用于WesterBlot，如果 ...

相关专题 生物实验中的封闭剂 杂交膜上有很多非特异性的蛋白质结合位点，为防止这些位点与抗体结合引起非特异的染色和背景，一般用惰性蛋白质或非离子去污剂封闭膜上的未结合位点来降低抗体的非特异性结合。封闭剂应该封闭所有未结合位点而不替换膜上的靶蛋白、不结合靶蛋白的表位，也不与抗体或检测试剂有交叉反应。最常见的封闭剂是BSA、脱脂奶粉、酪蛋白、明胶和 ...

相关专题 SOUTHERN BLOT的英文步骤，你懂得。 1. Run the gel as normal. Often for genomic southerns it is desirable to run long gels (18cm) over 4-6hrs. 2. Photograph the gel with a ruler ...

相关专题 用于检测重组DNA，也可分析DNA样品中是否有与探针序列同源的DNA片段。用于基因诊断，也可验证检测片段的分子量大小。将基因组DNA经限制性内切酶酶切，进行琼脂糖电泳，把分离后定位在凝胶上的不同分子量的DNA经碱变性处理，将凝胶中变性的DNA转移至一固相支持滤膜。利用标记的某一DNA、RNA或寡核苷酸与固着于滤膜上的DNA发生同源 ...

相关专题 蛋白质的检测与分析――western blot 操作步骤 一个基因表达终极结果是产生相应的蛋白质(或酶)。因此检测蛋白质是测定基因表达的主要标志，检测蛋白质的方法很多，除ELISA法外，也可用与检测DNA和RNA相类似的吸印方法。前两法有“南”和“北”之意，故本法遂被延伸称为Western(西)印迹法，该法能用SDS聚丙烯酰胺凝胶 ...

相关专题 1. 30%储备胶溶液： 丙烯酰胺(Acr) 29.0g　　　　　　　　　　　亚甲双丙烯酰胺(Bis) 1.0g　 混匀后ddH2O，37℃溶解，定容至100ml，棕色瓶存于室温。 2. 4×分离胶缓冲液(1mol/L Tris-HCl PH 8.8) Tris 18.17g加ddH2O溶解，浓盐酸调PH 8.8，定容至100ml ...

相关专题 Western免疫印迹(western blot)是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。 一、原理 与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗 ...

相关专题 在电流的作用下，使蛋白质从胶转移至固相载体(膜)上。膜的选择：印迹中常用的固相材料有NC膜、DBM、DDT、尼龙膜、PVDF等。我们选用PVDF(聚偏二氟乙烯)，其具有更好的蛋白吸附、物理强度，以及具有更好的化学兼容性。 有两种规格：Immobilon-P(0.45um)和Immobilon-PSQ(0.2um for MW A ...