蛋白质技术

allenylq 各位战友，最近投了一篇文章，reviewer的提了一个意见：“Antibodies to GPCRs are notoriously unreliable, and this data would be strengthened by further demonstrating presence of the receptor message in this cells , and/or showing specificity of the antibody used.”我是用western blot检测该受体的 ...

zuoliping 急切求助：因为有在文献查到PIK3/AKT与我要做的一个蛋白的表达有关，我想做这个通路的抑制剂与这个蛋白的表达的关系，看是否有时间和剂量的依赖性。但是抑制剂的说明说对这个剂量的范围很大，有查文献，在不同细胞中取的浓度组都不太一样，我想知道这些不同的浓度组是怎么确定的呢？要做MTT吗？希望大家不吝赐教！不甚感激！happytears 当然要做多次预实验了，做之前你需要大量阅读文献，看别人做过的你这种细 ...

hddking 从某信号通路中间阻断，然后看一下阻断前后细胞蛋白质组学变化（打算用双向电泳研究），可行吗 ？freecell 你的研究目的是什么？hddking 看阻断前后蛋白质组学变化woxingwosu 应该是可行的吧hddking 信号从中间阻断的话，这个个信号发挥的功能是全被阻断了，还是部分阻断？吴佰霖 hddking wrote:信号从中间阻断的话，这个个信号发挥的功能是全被阻断了，还是部分阻断？对，特别是注意是否有旁路相通，否则实 ...

wyj2002 低氧诱导因子-1 是一种核转录因子，看到有些文献直接抽胞浆蛋白进行实验，请问有经验的朋友，是抽取胞浆蛋白还是核蛋白？先谢过了！xhjggl 可以用胞浆蛋白和核蛋白提取试剂盒，确定其在胞浆和核中的的分布情况，也可能是在胞浆中合成再进入细胞核中的，上海生工就有这样的试剂盒卖。细胞核蛋白/浆蛋白抽提试剂盒Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit产品说明：本试剂盒用于从哺乳动物组织 ...

hupengfei5566 各位大虾，我最近在做K562自噬方面的研究，但是几次Wstern Blot结果跑下来我发现一个很奇怪的现象，就是我的未处理组的K562细胞的自噬水平波动很大。按理，正常水平下自噬水平应该是比较低的，但我做的结果中第一次结果比较好，后几次发现未处理组的细胞自噬水平也很高，就好像诱导了一样，LC3-Ⅱ的表达水平比LC3-Ⅰ还要高，我在附件中放了3次的实验结果，第一孔就是我的未处理组。请高手指教。不 ...

xxzjcg 大多数人认为原核细胞表达的蛋白没活性，但我最近看了篇文献原核细胞表达的蛋白有活性，并应用于炎症肠病的治疗，请教一下原核细胞表达的蛋白有活性吗lmnsmu 这个问题不能绝对的看待，需要一分为二。原核细胞表达的原核蛋白肯定有活性；对真核蛋白用原核体系进行表达，一些结构简单的、能够可溶表达的蛋白进行简单的尿素梯度等处理后就可以具备活性；而结构复杂、以包涵体形式表达的最初表达的蛋白没有活性，需要进行特殊的复性 ...

rebeccagold 大家好。最近在做建一个高表达某G蛋白偶联受体的CHO细胞株，载体是pEGFP-C1。稳定筛选后，细胞的荧光表达很好。但奇怪的问题是，该受体定位出现了问题。原本该定位在膜的G蛋白偶联受体，现在基本上呈全细胞分布，而且核尤其亮。百思不得其解。请各位战友指点。附图为该细胞的Confocal图，没有染核。多谢大家啦！woxingwosu 呵呵，你的confocal照的效果很不好呀。不过确实可以看到其定位主要 ...

rebeccagold 大家好。最近在做建一个高表达某G蛋白偶联受体的CHO细胞株，载体是pEGFP-C1。稳定筛选后，细胞的荧光表达很好。但奇怪的问题是，该受体定位出现了问题。原本该定位在膜的G蛋白偶联受体，现在基本上呈全细胞分布，而且核尤其亮。百思不得其解。请各位战友指点。附图为该细胞的Confocal图，没有染核。多谢大家啦！kern6549 会不会是该受体带上了EGFP后无法定位到膜上了。rebeccagold 谢谢 ...

月下独见 我最近打算提核蛋白做EMSA，我是自己配制的buffer，其中要加入100x Protease Inhibitor使buffer里含有1x Protease Inhibitor。这个100x Protease Inhibitor有没有买的？还是要自己配制。我查了一下资料Protease Inhibitor里含有Aprotinin Leupeptin Pepstatin PMSF，如果自己配Protease Inhibitor的话以上的试剂要 ...

clariceerica 1,请问用多少细胞就能做出qrt-pcr呢?小笨的研究对象是被化疗药打到粒缺的肿瘤病人,最少的目标细胞理论上只有300个细胞/ml血,也不知道磁珠能不能不能把它们分出来.2,同样的细胞做western行么,如果蛋白表达量是跟notch的差不多呢?3,请问这样的问题如何解决:总RNA做相对定量qrt-pcr,但是表达的细胞只占一定比例x%,怎样将结果校正到对应表达的这部分细胞?zhujoker 根 ...

clariceerica 要看某个基因对应的DNA及mRNA上,它翻译出的蛋白的锌指区以及脱乙酰酶作用区各在那一段.B)谢谢啦谢谢啦~~woxingwosu http://www.genecards.org/看看有没有需要的clariceerica woxingwosu wrote:http://www.genecards.org/看看有没有需要的:O):O):O):O)打开了一封天书!!!clariceerica 我..我被打败了.吭哧看了那许多 ...

糖嘻嘻 请问在哪个网站可以模拟多肽链蛋白质空间结构？dyykll2011 给你一个课件 好好看哦 蛋白质结构与功能预测（浙江大学沃森基因组科学研究院生信培训课件）dyykll2011 忘了传上去了cyzhgt 非常有用啊！！！modestbird 非常感谢 提供呢本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

daydayupmj 最近做了加入刺激因素后细胞AMPK的激活情况，我选择了0,30min ,60min,120min,240min提取蛋白，结果发现在60min 时总AMPK和P-AMPK表达都很弱，有几点不清楚，信号表达会在某个时间点突然降低，然后再回升吗,非磷酸化的蛋白也会随时间变化而变化吗，再有活化情况该如何比较daydayupmj 还有细胞在加入处理因素前需要同步化处理吗07yhguan daydayupmj wrote: ...

霍一刀hxs 如何由已知蛋白查询其调控的基因？已知一个蛋白质，通过哪些方法可以查询其调控的基因？谢谢。woxingwosu 比较直接的是察看看这个蛋白是否含有与潜在的DNA结合（特别是promoter）的区域，然后做一下real time或reporter assay等验证一下，有效果就可以通过点突变等进一步验证。如果要大范围的筛选受其调控的基因，需要microarray或者2D吧，我想。zjubell 呵呵，这个是最典型的免疫 ...

perpetuity_love 求助关于组蛋白乙酰化的技术，用于RNAa，最好能有相关文献支持，做一个课题需要。54wws 你好！我近期也在做组蛋白乙酰化，买的是Epigentek公司的Epi Quik Tissue Acetyl-Histone H3 ChIP Kit（cat.#P-2012-48）。已经做了两个多月了，用了两个试剂盒，都没有结果，包括input。我用试剂盒提取出来的DNA产物跑胶、进行PCR，都没有结果（引物和体系用其他方法提取的 ...

tianjiaoya 我想构建一个真核表达质粒，用这个真核表达质粒来表达绿色荧光蛋白，但是我想让绿色荧光蛋白的表达受酵母菌GLA4转录因子的调控，也就是说有GLA4存在，这个质粒就表达绿色荧光蛋白，没有GLA4存在，就不表达绿色荧光蛋白。当然需要对真核表达质粒上的启动子做相应的调整，但是我现在的问题是，转录因子GLA4能不能对质粒上有相应调控元件的表达盒，进行调控？据说GLA4上有核定位元件，要是将这个核定位序列 ...

lingwu 本人做WB检测加入因子后p-AKT的变化，结果显示15分钟和30分钟条带叫空白组弱，而到60分钟条带开始增强，6小时达到高峰（较空白组高），这种情况是不是表明因子能够激活p-AKT？是不是一种迟发的激活方式，其上游是不是还有其他的信号转导过程？zhanghai123 总AKT是否也增高了？kern6549 建议重复实验，如果确实得到先弱后强的结果。个人认为加入你的因子后AKT的磷酸化过程可能比较复杂，不能简单 ...

janetlee1976 我记得从前看到过检测细胞总体的蛋白质乙酰化水平的方法，大概是免疫荧光或者共聚焦显微之类的方法，现在找不到了，不知道哪位知道，请赐教（不是检测某种组蛋白或某种蛋白质的乙酰化）。可否提供参考文献？谢谢！woxingwosu 免疫荧光后再共聚焦应该是可行的，或者是western也行。目前除了蛋白特异性的乙酰化抗体以外，还有一些针对乙酰化赖氨酸（Lysine）的抗体Acetylated-Lysine An ...

宝贝儿妮妮 请教各位大虾，我做的是AIF（凋亡诱导因子），激活后从胞浆释放到胞核，与DNA结合，引起DNA的片段化那我是不是必须得提取核蛋白，来证实发生了核转位？要怎么来提取效果好一点？时间紧急啊，非常感谢lily628 买抽提核蛋白的试剂盒，国内的或国外的都行．xhjggl 上海生工有 021-37772436细胞核蛋白质提取试剂盒Nucleoprotein Protein Extraction Kit产品说明：本试剂盒提供独特的组份， ...

秦奋 为什么HIV-gp41与原核PET28a质粒构建后，行诱导表达，SDS-PAGE无结果，而WB却有结果，这种情况怎么回事？（构建后测序同源性达95%，而且已酶切认证构建成功） 谢谢zhujoker “SDS-PAGE无结果，而WB却有结果”是什么意思，你表述清楚一点，要不人家会有疑惑的。其实这主要看你是否诱导成功。个人认为还有就是你在原核里面表达，作为包涵体存在形式，你是否将蛋白提出来了呢？woxingwosu 首先，我有点疑问 ...