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PCR的原理和应用视频

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聚合酶链式反应(PCR)详细步骤

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逆转录(RT)实验步骤

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利用实时定量PCR分析基因相对表达量

2-△△CT方法是相对定量real-time PCR的一种简便方法。本文介绍了该方法的推导,假设及其应用。本文还介绍了两种2-△△CT衍生方法的推导和应用及它们在实时定量PCR在的运用。

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Amplification and Labelling with Cy dyes

1.Two rounds of DNA synthesis to incorporate fixed sequences Prepare the following: Reaction tube containing the following: 7ml DNA to be amplified and labelled 2ml 5X T7 Sequenase Buffer 1ml 50mM Pim ...

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实时PCR/RT-PCR解决方案

高性能的实时定量PCR和RT-PCR要求高性能的系统。易于使用的qPCR 超级混合物、一步和两步定量RT-PCR系统、以及荧光检测平台,在一个较宽的动态范围内提供更高的灵敏度和特异性,它们利用了最先进的技术,包括: 使用抗体介导热启动技术的Platinum ® Taq DNA Polymerase提供在室温下组合PCR反应时更高的特异性和产量。 增加了热稳定性和半衰期的SuperScri ...

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新型的基因分型技术(SNP分型):巢式PCR-RFLP技术

随着生命科学迅猛的发展,与之相适应的实验技术手段越来越复杂和专业化,对于科研人员实验技能要求也越来越高。由于生物学实验高度的复杂性、使得一个科研人员往往只能精通某一方向的实验。因此许多生物技术公司应孕而生,他们提供了许多专业的服务,其中最常规的技术服务包括核酸、蛋白测序、引物合成,SNP分型动物培养及转基因动物实验。 在国外,生命科学的研究已经初步形成了一个大型技术平台共享的研究形式,科研人员的 ...

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高质量RNA的标准

real time RT-qPCR 是检测样本中特定基因表达量的有效方法,包含逆转录步骤和定量PCR步骤。好的开始是成功的一半,获得高质量的、能正确反应样品中转录情况的RNA,对于其后的定量结果,自然是非常重要的。 Mikael Kubista,教授 R&D TATAA Biocenter主任: RNA质量包含两个方面:样品的纯度和RNA的完整性。样品纯 ...

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Protocol for Real-Time RT-PCR

This protocol describes the detailed experimental procedure for real-time RT-PCR using SYBR Green I as mentioned in Xiaowei Wang and Brian Seed (2003) A PCR primer bank for quantitative gene expressio ...

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定量PCR技术

定量PCR(Polymerase Chain Reaction)技术有广义概念和狭义概念。广义概念的定量PCR技术是指以外参或内参为标准,通过对PCR终产物的分析或PCR过程的监测,进行PCR起始模板量的定量。  广义概念下的定量PCR技术可以分为五种类型:(1)外参法+终产物分析。所谓“外参法”是指样本与阳性参照在两个反应容器内反应。这种类型没有对样本进行质控监测,易出现 ...

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Quantitative PCR

Joseph SambrookPeter Maccallum Cancer Institute and The University of Melbourne AustraliaDavid W. RussellUniversity of Texas Southwestern Medical Center DallasExcerpted From Molecular Cloning: A Labor ...

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实时荧光定量PCR的研究进展及其应用

发布时间04年07月13日 11时13分     张 蓓 沈立松上海第二医科大学附属新华医院上海儿童医学中心实验诊断中心 多聚集链反应(polymerase chain reactionPCR)技术发明至今已近20年了,在这期间技术得到了不断的发展,近年来出现的实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR)技 ...

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定量PCR(Polymerase Chain Reaction)技术

定量PCR(Polymerase Chain Reaction)技术有广义概念和狭义概念。广义概念的定量PCR技术是指以外参或内参为标准,通过对PCR终产物的分析或PCR过程的监测,进行PCR起始模板量的定量。 广义概念下的定量PCR技术可以分为五种类型 (1)外参法+终产物分析。所谓“外参法”是指样本与阳性参照在两个反应容器内反应。这种类型没有对样本进行质控监测,易出现假 ...

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Real-time PCR 的探针如何设计

自90年代Taqman探针诞生以来,虽然荧光探针(引物)不断有新的技术出现,但是作为一种经典的定量PCR技术,Taqman探针技术仍然是许多实验研究人员进行定量检测的首选,这主要是因为相对于SYBR荧光染料,Taqman探针具有序列特异性,只结合到互补区,而且荧光信号与扩增的拷贝数具有一一对应的关系,因此特异性强灵敏度高,而且条件优化容易;而相对于杂交探针,Taqman探针只要设计一条探针,因此探 ...

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Real time PCR 跟RT-PCR有什么区别

实时荧光定量PCR原理 所谓实时荧光定量PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。 1.内标在传统定量中的作用 由于传统定量方法都是终点检测,即PCR到达平台期后进行检测,而PCR经过对数期扩增到达平台期时,检测重现性极差。同一个模板在96孔PCR仪上做96次重复实验,所得结果有很大差异因此无法直接从终点产 ...

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Equipment And Reagents For Real-Time PCR

In September 1993 Higuchi et al. published a report in the journal Biotechnology (NY). Titled “Kinetic PCR analysis: real-time monitoring of DNA amplification reactions” the paper describe ...

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Real-Time RT-PCR

RT-PCR (reverse transcription-polymerase chain reaction) is the most sensitive technique for mRNA detection and quantitation currently available. Compared to the two other commonly used techniques for ...

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SNP检测公司及费用

假设样本数为35: 1、采用测序方案:测序一类的公司都可以,生工,英骏,奥科等等,你提供PCR产物,他们进行测序。 2、采用TAQMAN或MGB探针方案:基康,复旦悦达,联合基因等,强烈建议不要采用这种方案,特贵。 3、采用微测序方案:翼和生物。就是应用LDR连接酶的反应,发射荧光的进行检测的。 效果和价钱比较: 测序要你自己做PCR,但测序的好坏要看你PCR产物的质量和测序公司的能力,价格大概 ...

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实时荧光PCR检测技术

众所周知,PCR(聚合酶链反应)技术自从1985年问世以来,经过十几年的发展,已成为实验室的常规技术。它是现代分子生物学研究中不可缺少的手段,是一种极为敏感的放大系统。相比于传统的临床诊断方法,核酸诊断是分子水平上的诊断技术,可以弥补传统临床诊断方法的某些缺陷,比如,核酸诊断能直接揭示病原体的存在,能客观反映病原体在人体内感染及活动情况,可以作为临床治疗中的一个有效监控手段,另外采用核酸诊断技术还 ...

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real time PCRTaqman探针设计、实时多重PCR探针的选择、引物的设计及评价

一、实时荧光Taqman 探针设计 总原则:探针选择要保守,引物选择要保守,因此必须找一段100-200bp相对要保守的片段来设计引物与探针。即real-time PCR的扩增片段是50bp----150bp。当找不到150bp的保守片段时,必须确保探针的片段是保守的。 在设计探针和引物时,要同时考虑在两条链上设计引物与探针。但要注意的是:在那条链上设计探针时,就应靠近在同一条链上设计的引物(即上 ...

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