PCR技术

PCR技术（多聚酶链式反应）是现代分子生物学的一个巨大突破，它能在体外迅速、 大量、灵敏地扩增基因片段。可是，经PCR技术扩增的大量相关基因片段如何能有效 拼接，却是一个很值行探讨的问题。传统的方法是引入限制性内切酶位点，这不但操 作繁杂，而有时为了构建限性位点还会影响解读三联密码的正确性。本介绍两种基因 拼接的新方法，即SOE和SDL法，就能巧妙地解决这个问题。 SOE法　　1989年，Hort ...

随着分子生物学技术的发展，检测基因结构和突变的方法不断涌现.尤其是PCR技术问 世以后，各种与PCR相结合的基因检测技术进一步推动了基因研究的发展.如不对称 PCR产物的直接测序、核糖核酸酶酶切法(Ribonuclease cleavage，RNAase)、限制性 片段长度多态性分析(Restriction Fragment Length Polymorphism，RFLP)等等已成 为基因分析的 ...

进化遗传学具有两个并列的研究方向：系统发育的重建和种群分析。自1962年， Zuckerkandl和Pauling提出蛋白质序列和基因序列的比较可以象分子种一样用于标志 现存物种分化的时间以来，各种生化方法被用于系统发育的研究。在最初二十年内， 同功酶的电泳分析、免疫学比较和蛋白质序列分析被广泛地应用。而最近，DNA-DNA 杂交和核糖体RNA序列分析为分类学做出了重要贡献。这些技术大多有局限性， ...

高等生物遗传图谱的构建依赖于选择性杂交后代的分析或者通过家系分析法来计 算连锁关系。对人类而言仅后者是可行的。使用长度多态性限制片段（RFLPS）在构 建人连锁图谱方面已取得长足的进步。为了对带有与已知表现型相关的RFLP标记的基 因进行定位，首先得建立间隔约10CM的遗传标记束（平均1CM等于1％重组），这样没 有基因离标记RFLP的距离会超过5CM。可靠的统计表明家系分析能够检测的遗传间距 精 ...

PCR技术代替了为测序而反复进行的分子克隆和模板制备步骤。PCR技术与自动测 序技术相结合后，它将成为一种最快、最有效的测定核苷权序列的方法。本章主要综 述各种测模板的制备以及如何完成PCR产物的直接测序。与传统的将PCR片段克隆入质 粒或病毒基因组相比，直接序列分析有两个主要的优点:1)由于它是一个不依赖于生 物体(如细菌、病毒等)的体外系统，因而它更容易标准化(即例于自化2);对于每个待 测样 ...

最常用的基因分离方法需要建立组织或细胞RNA的cDNA库，然后用抗体或 DNA探针筛选出感兴趣的基因。虽然这个方法已成功地克隆了大量基因，但建立和筛 选CDNA库是一项非常耗时．费力的工作，而且用寡聚核苷酸作探针进行筛选需大量蛋 白质序列结构的资料。聚合酶链的反应（PCR）方法可使一种特异DNA扩增几百万倍， 并已成为分子克隆和诊断的十分有用的工具。最近，TAQDNA聚合酶的使用极大地简化 了PC ...

Contents Factors Affecting the PCR Denaturing Temperature and Time Annealing Temperature and Primer Design Primer Length Degenerate Primers Elongation Temperature and Time Reaction Buffer Cycle Numb ...

REVERSE TRANSCRIPTION PCR: RNA - LOTS OF DNA Contents Reverse Transcription Reaction Polymerase Chain Reaction Reverse Transcription Reaction: This provides the cDNA - by extension from a primer compl ...

A method to re-PCR unique bands from products of mixed size Contents INTRODUCTION PROTOCOL COMMENTS INTRODUCTION The products of a PCR reaction - especially when this is done on eukaryotic genomic DNA ...

General Advice PCR allows the production of more than 10 million copies of a target DNA sequence from only a few molecules. The sensitivity of this technique means that the sample should not be contam ...

General Advice PCR allows the production of more than 10 million copies of a target DNA sequence from only a few molecules. The sensitivity of this technique means that the sample should not be contam ...

・ What's PCR? (Michael Blaber's Lab)Illustrated introduction to usr/localious aspects of PCR technique. It's very valuable not only for those new to PCR but also those familiar with PCR.・ ...

・ Agarose Gel Electrophoresis of PCR Products (Robert H. Cruickshank)・ Agarose Gel Electrophoresis of PCR Products (Immunology Resource)・ DIAPOPS Technique (Detection of Immobi ...

PCR Primer Design and Reaction Optimization (Molecular Biology Techniques Manual) PCR Primer Design (Newman Lab) PCR Primer Design (Eppendorf)Detailed guide for primer design. PCR Primer Design ...

・ Long PCR (Church Lab)PCR conditioning for different templates primer design and moreLong PCR Reagents and Guidelines (Harusr/locald)Detailed protocol for long distance PCR including template ...

About in situ PCR (Applied Biosystems)Basic information about in situ PCR and its applications. The In Situ PCR: Amplification and Detection in a Cellular Context (Ernest F. Retzel et al)General guide ...

・ Standard PCR Protocol (Molecular Biology Techniques Manual)The followings are described in detailRecommended Reagent ConcentrationsRecommended Reaction Conditions"Hot Start" PCRAsymmetric PC ...

主要内容如下：・ RT-PCR ・ Competitive and Quantative RT-PCR ・ In Situ RT-PCR ・ RL-PCR ・ DNA Contamination ・ RT-PCR FAQ RT-PCR・ RT-PCR Protocol (UMBC)Fir ...

・ PCR Additives (Robert H. Cruickshank)A usr/localiety of PCR additives and enhancing agents have been used to increase the yield specificty and consistency of PCR reactions. Whilst these addi ...

Recommended Reagent Concentrations: Primers: 0.2 - 1.0 uM Nucleotides: 50 - 200 uM EACH dNTP Dimethyl sulphoxide (DMSO): 0 - 10% (v/v) Taq polymerase: 0.5 - 1.0 Units/50ul rxn Target DNA: 1 ng - 1 ug ...