PCR技术

Technically SpeakingAccess RT-PCR SystemBy Patrick BurkePromega CorporationTranscription of RNA from DNA is the principal step in executing a cell's genetic program. Numerous techniques have been developed to investigate gene expression at the level of transcription, incl ...

再求助内参，接上次？http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=5744926&sty=1&tpg=7&age=0人口腔鳞癌Tca-8113细胞 端粒酶检测引物设计和内参引物http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=5745223&sty=1&tpg=7&age=0搞不懂的PCR结果http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=57 ...

关于MSP，园子里的讨论帖子不少，但很多战友还是跑不出条带。此帖结合本人的亲身经历，就MSP提些建设性的意见，谨奉献给仍奋斗在一线的战友们。先简要的说说MSP法的原理，即用亚硫酸氢钠修饰处理基因组DNA，所有未发生甲基化的胞嘧啶（C）被转化为尿嘧啶（U）而甲基化的胞嘧啶则不变。设计针对甲基化和非甲基化序列的引物进行PCR，然后通过电泳图检测甲基化状态。本人研究的课题是一个常见的抑癌基因，前期的研究发现此基因的表达 ...

目的：RT-PCR克隆全长目的基因做表达基因11: M25157. Rat Cu, Zn supero... LinksLOCUS RATSODCZL 601 bp mRNA linear ROD 27-APR-1993DEFINITION Rat Cu, Zn superoxide dismutase mRNA, complete cds.ACCESSION M25157VERSION M25157.1 GI:207011KEYWORDS superoxide dismutase.SOURCE Rattus norveg ...

2006.3.1~3.31 不规范帖除外，请大家规范发帖！【求助】怎样在EGFP载体前加入SP6启动子http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=5634193&sty=1&tpg=40&age=0【求助】BAT40 微卫星大小http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=5639177&sty=1&tpg=40&age=0【求助】POPGene分析请教http://www.dx ...

参考体系酶切体系（参考）：质粒 17ulbuffer 2ul酶 1ul－－－－－－－－－－37度，过夜。酶切位点在质粒上，所选的两个酶的酶切位点不可以靠的太近，如6bp建议载体质粒不要用双酶切,用两次单酶切之后切胶回收.另外建议加多以下两个个步骤:1.PCR产物的酶切片断做TA克隆,之后再酶切回收,与载体相连.2.目的片段与载体连接之后建议先转化DH5α这些容易转化的菌株. 然后筛选到的阳性克隆测序之后,提质粒,用质粒转化BL21,转化率很高 ...

实验要求为：用实时荧光定量PCR检测损伤前后大鼠某一基因的表达变化，选用Taq man法，从ncbi中查到基因cDNA序列如下：（基因编号：NM_053613）1 atgaagaggg cgtcctccgg aggaagccgg ctgccgacat gggtgttatg gctacaggcc61 tggagggtag caacgccctg ccctggtgcc tgtgtgtgct acaatgagcc caaggtcaca121 acaagccgcc ccca ...

下面是我设计的引物的BLAST结果，请大虾帮我解释一下。我这对引物做PCR是否有问题？谢谢。Query=(40 letters)Database: All GenBank+EMBL+DDBJ+PDB sequences (but no EST, STS,GSS,environmental samples or phase 0, 1 or 2 HTGS sequences)2,862,112 sequences; 12,768,194,998 total lettersIf you have any problems or q ...

我要做一个RT-PCR看看PEDF在组织中的表达在uni-sts里找到PEDF的STS请问是否可以直接拿Forward primer: AGAACAAAGATGAACGGTCGGTReverse primer: ACCAACTCTTTGCAGGACATGA来做RT-PCR的引物？如何验证？谢谢http://www.ncbi.nlm.nih.gov/genome/sts/sts.cgi?uid=211288UniSTS:211288 Li ...

1.问题：RT-PCR灵敏度：在琼脂糖凝胶分析中看到少量或没有RT-PCR产物。可能原因：1）RNA被降解建议解决方法：在用来验证完整性之前先在变性胶上分析RNA使用良好的无污染技术分离RNA；在将组织从动物体取出后立刻处理在100％甲酰胺中储存RNA；如果使用胎盘RNase抑制剂，不要加热超过45℃或pH超过8.0，否则抑制剂或释放所有结合的RNase。而且，在≥0.8mM DTT时加入RNase抑制剂，一定要存在DTT ...

关于REAL-TIME引物设计和探针选择， 附有三种常用探针的介绍网址，希望对大家有用1.The design step: the selection of PCR primers and probes2.Choice of detection method (SYBR Green or a fluoresent nucleic acid probe) for the real time PCR.Generally, real time PCR with SYBR green is used to optimize primers and is principa ...

欲通过RT-PCR检测一种基因的不同剪接异构体表达情况，在文献(cancer research, oncogene)中查到的两对引物序列如下：P1 5' atg agg atc cca tgg gcc agc a 3'P2 5' aag ggc ttt tca ctt gtt tta c 3'P1 5' atg agg atc cca tgg gcc agc a 3'P3 5' aag ggc ttt tca cct gta tga g 3'RT用的是MBI的试剂盒,反应体系20ul：总RNA 4.0 ug, oligo 1 ul,M-Mulv 1 ul,反应条件为70℃5分钟,37℃5分钟,42℃60分钟,70℃1 ...

PCR的问题，无疑是绝大多数学生物的人都关心的问题，小编将相关内容整理出来，与大家交流讨论，希望对大家有所帮助。由于内容过多，分成了几个部分：引物设计、PCR成分、PCR反应参数、提高PCR扩增特异性、PCR污染与对策。　　好东西收藏在手边，查看其它系列内容，请在GCBI微信页面输入“PCR”，即可查看下面的内容：　　引物设计　　PCR成分　　PCR反应参数　　提高PCR扩增特异性　　PCR污染与对策　　所谓“工欲善其事，必先利其器”，设计引物常用软件：在线P ...

Real-Time RT-PCRhttp://www.ambion.com/techlib/basics/rtpcr/by Subbu Dharmaraj, MSRT-PCR (reverse transcription-polymerase chain reaction) is the most sensitive technique for mRNA detection and quantitation currently available. Compared to the two other commonly ...

PCR产物的电泳检测时间　　一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。假阴性，不出现扩增条带　　PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。　　模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消 化除净，特别是染色体中的组蛋白，④在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。⑤模 板核酸变性不彻底。在酶和引物质量好时 ...

Access RT-PCR系统1)什么是Access RT-PCR？2)什么是Access RT-PCR系统？3)总RNA能否作为模板，是否一定需要poly(A)+RNA?4)使用Access RT-PCR系统需要的RNA的量是多少？5)同一般常用方法相比较，Access RT-PCR系统有哪些优点？6)使用Access RT-PCR系统需要优化哪些条件？7)Tf1DNA聚合酶是否有反转录酶活力？8)为什 Access RT-PCR系统不使用MMLV反转 ...

影响PCR结果的关键因素总结前人所说，多指教！理想的PCR反应应该是特异、高效、忠实的。研究表明PCR结果的特异、高效、忠实性都受反应中众多成分的影响，包括缓冲条件、PCR循环方式（温度和每一步的持续时间）以及DNA聚合酶等。而许多研究人员往往把PCR结果的不理想过多的归罪于引物合成的质量。其实想得到一个好的PCR结果除了要有高质量的引物外，还需要对以下每个因素的恰当控制。1，模板包括基因组DNA、质粒DNA和噬 ...

生物谷： RT-PCR实验有三步：抽提RNA，RT，PCR。要求：1.做RT前必需测RNA浓度，逆转录体系对RNA量还是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不会出太大问题。3. PCR，按常规。但如需扩长片段，则对前两步要求较高，需要有完整的cDNA存在，不是单改变Mg2+浓度、退火温度能解决的。1）RT和PCR时的引物设计是不是一定要先知道目的基因的序列？必须在RT时，引物设计有3种方法即a：Random 9me ...

如何确定是TAG出错，还是模板变异？我的测序结果怎么不对？合成c-myc、c-myb、pcna的as-odn求助 帮忙设计嵌套PCR的引物有人用过Takara的mutanbest试剂盒么?差异显示电泳设备的选择？关于同种不同品系看家基因的可比性问题基因特异性引物如何设计? oligodT共1OD时怎么进行稀释用于RT?b-actin作内参时如何使结果归一的原位RT-PCR是否既可定量又可定位？讨论：SSCP分析基因多态性 ...

先找到需要设计引物的目标基因的在有引物序列的mRNA序列，可以通过全文（如最先发现该基因的文章），全文中有时可以找到大鼠c-jun mRNA序列的ACCESSION NUMBER，在PubMed中的“Nucleotide”中用此ACCESSION NUMBER就能找到序列。可以利用这个ACCESSION NUMBER在PubMed中的“Nucleotide”中搜索到序列后，点击右边的“Links”，再点击里面的“Related Se ...