RNA实验技术

zhuyuan0099 我看国外文献，在用药物刺激RNA沉默某个基因的细胞克隆时，多数这样分组分组control siRNA+药物组，control siRNA组，要沉默基因siRNA+药物组，要沉默基因siRNA组。其中control siRNA组和要沉默基因siRNA组一定要吗？为什么？请各位老师指点，小弟刚接触，见笑了。freecell 当然需要。control siRNA组：RNAi试验必须沉默基因siRNA组： 你没有加药物时的背 ...

light666 如题。miRNA的前面加上cel是什么意思？谢谢martin4720 C. elegans miRNA= Caenorhabditis elegans miRNAs秀丽隐杆线虫秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis elegans，C. elegans）是一种可以独立生存的线虫 （roundworm），其个体小，成体仅1.5mm长，为雌雄同体（hermaphrodites），雄性个体仅占群体的0.2％，可自体受精或双性生殖；在20℃下 ...

zhang184369688 用survivin引物扩增小鼠卵巢的总cDNA，却扩出了两条条带，而且目的条带不如新出现的条带明显，这是为什么呢？请大侠给予指导！小么小小子 你好，您扩的条带是多大的呢，出现的新条带又是多大的呢~小么小小子 因为我也碰到了这个问题，虽然您帖子有点久了，最后您解决没有呢zhang184369688 我觉得是杂带！小么小小子 时间有些久了哈，我现在做的实验跟你描述的基本一样~也是扩增小鼠卵巢总cDNA，出 ...

小pig 小弟小硕一名，老板没有课题，要我自己想，我后来查了文献跟老板说了想做RNA干扰的体外实验，后来再查但是siRNA的相关价格都已经好几千了，更不用说加上引物设计，试剂耗材等等那些了，所以想在这里问问做过的大哥大姐们，能说个大概费用。因为我怕老板没啥经费，那我只能尽快另找课题了。呜呜呜，谢谢了！freecell siRNA细胞培养及其耗材等等加起来没有个一两万，肯定不好玩。这样的老板，你读它作甚？小pig 厄，读的时候不 ...

dingsl 大家好，有没有同学知道怎么能找到线粒体某个基因的全长cDNA序列呀？找了一天都没找到，数据库上的都只有编码区序列，哭啊，求助中。。。freecell http://www.google.com/#hl=en&source=hp&q=%E7%BA%BF%E7%B2%92%E4%BD%93%E5%9F%BA%E5%9B%A0%E5%85%A8%E9%95%BF&aq=f&aqi=&aql=&oq=&gs_rfai=CtiHoppNVTNCOGo- ...

佟子 如题，我想研究一种蛋白质在脑缺血病理生理过程中的意义，想到用RNAi技术来关闭相关mRNA,以减少该种蛋白质的翻译。主要想从整体动物和细胞水平来阐述其意义，但我不是做分生的，没有做过RNAi技术，所以相关技术不懂，想请问园子里的各位高手：1，我能用从公司直接购买的化学合成的SiRNA直接注射到侧脑室吗？2，能将化学合成的SiRNA直接转染到细胞吗？3，要求基因沉默的时间不长，一周之内就行，不知我的上述方案可行吗 ...

kiss9499 小弟新人，最近想做mirna的ISH，定了exiqon的探针，fitc标记的，有哪位兄弟做过的，发个protocol参考一下，虽然官网有，但是英文的，看起来不舒服，而且还有个小疑问，就是fitc标记的探针，杂交完直接就去荧光显微镜看荧光吗，还是要再买个抗fitc的抗体反应才能看到荧光？谢谢了啊，求助求助啊freecell 你的问题，答案在这里：http://www.nature.com/nprot/journ ...

grsun2000 采用microinspector如何进行已知序列的mirna结合位点。在tatgetscan中预测有3个位点。按照microinspector德说明怎么都运行不了。说明如下MicroInspector is running by the Tabler lab at the Institute of Molecular Biology and Biotechnology(IMBB), Heraklion, Greece and University of Plovdiv, ...

yh_sunflower 请问为什么NCBI中的同一个蛋白，同一个物种还有好几种不同的序列呢，以哪个为主呢？waterbeijing 你指的是不止一种cDNA的编码区吧很多时候基因转录有不止一个转录起始位点，而转录后会发生多种mRNA的选择性剪接，最终产生不同序列的cDNA甚至不同编码区组合侠骨仁医 yh_sunflower wrote:请问为什么NCBI中的同一个蛋白，同一个物种还有好几种不同的序列呢，以哪个为主呢？同意 ...

huking 小弟最近在做miRNA功能方面的实验，但不知哪家公司的mimics和inhibitor质量会比较好，价格也比较实惠。希望得到大家指点，万分感谢！freecell 做RNA，ambion比较专业。kiss9499 ambion的太贵，我定的上海吉码的，还行，也不贵。madamcurie 做RNA，ambion专业；invitrogen 也挺好；Qiagen 也挺好：国内上海吉码公司比较便宜/politician_137 上海吉玛 ...

myskite u6序列很多，用哪个都可以吗？detector350 在做microRNA相对定量检测时候，一般选用U6或者5s。myskite 我想自己设计u6的反转引物，嗯，有设计好的吗？detector350 他们那边有的，你可以发邮件询问下kiss9499 没有，直接买的试剂盒yutoubaobao 不少文献都使用U6，我推荐你也用这个。jeff_lee 不要打广告，如果有需要请直接PM楼主！coldage U6，sense：5'-CTC ...

pianpianqiwu812 求助各位老师，近期我做了6张miRNA芯片，实验组3张，对照组3张，公司给我的数据只有相对值，没有P值。原因是芯片数量少，不需要做统计学分析。这种说法是否对？还有就是在计算差异倍数时是用实验组相对值分别除以对照组的相对值，倍数在2倍以上的入选。这样计算是否对，还是倍数计算也是要有相关软件的？我在这方面真是只菜鸟，不懂的很多，公司说的我感到有些可疑。:(zhujoker 这个你在做的时候就应该 ...

lyc_urology 请问前辈，我想调节miRNA后，做MTT，请问怎么保证inhibitor在MTT孵育液中的浓度，购买的inhibitor都是多少多少nmol的量，直接拿培养基配制吗？因为我转染需要的inhibitor的浓度是50nmol。zhujoker 转染后直接检测，不需要在培养基中配制。要不的话你合成的那点足够用吗？heychristy 转染后直接检测，不需要在培养基中配制willion1985 通常 miRNA mi ...

aning2599 运用生物信息学怎么反过来预测对某个基因的具有靶向调节作用的miRNA啊？zhujoker 其实你说的这块儿还是比较空白的。因为一般说来调节什么的表达是转录因子调控，但是由于miRNA很多位于基因间，所以很多调控无从研究。而很多位于内含子中的miRNA与其目的基因还不受同一启动子调控，所以对其研究还有一条很长的路要走。pianpianqiwu812 全基因组扫描是不是可以，现在不是挺热的吗?就是有点贵 ...

临窗听雪 最近想做microRNA的microarray, 筛选一下细胞经过treatment之后microRNA的表达变化，请问有做过这个的战友吗？这种方法的可靠性怎样？另外哪家公司的比较好？灰常感谢！yanglong ABI的taqman探针 嘿嘿pianpianqiwu812 一定要找一家大公司，而且实现说好后期数据分析的事，要不虽然做了不给做数据分析，相当于只完成三分之一，原始数据没有什么很大的意义，做芯片数据分析最重要 ...

naturewm 我是刚刚开始要做microRNA，所以很多东西都不是很熟悉，希望大家能够多帮忙。我现在想要克隆一个基因的3’UTR序列到含有luciferase报告基因的载体上，3‘UTR应该是在紧邻ORF下游与polyA tail之间的序列吧，但是这样的话整个3’UTR的长度就有大概1600bp了，是不是太长了，应该选择哪一段比较好？谢谢大家不吝赐教！希望以后能和大家有更多的交流！zhujoker 1600bp不长，可 ...

light666 干了若干年临床刚开始做实验，一些弄不明白的问题，请坛内高人指点一些：①做血液来源miRNA，qRT-PCR的内参到底用哪个比较好？文章里有U6、miR-16等，但有的文章互相有点矛盾。②我的血清样品很少，每个都不到1ml。选择stem-loop逆转录好，还是poly(A)好？问了几个朋友，有的说stem-loop省RNA样品，有的说poly(A)省RNA，到底哪一个更节省一些？我如果poly(A)的方法逆转录， ...

redsky 文献已经很多报道说某一miRNA在某一组织表达特异，但大多数miRNA不只在一个组织中表达，多数是在多个组织表达，而文献也将其表述为特异性表达miRNA，这个组织特异性miRNA如何鉴定的，可以根据某一miRNA在所有组织中的表达量平均值来定吗？如果高于这个平均值就是特异的？light666 我也有这样的疑问freecell Refer to this paper,or write to the author.Identifica ...

lyc_urology 本人，研一，要转染miRNA inhibitor,请教前辈:1、转染细胞一般inhibitor多少浓度？50nM?25nM?2、而且本人转然后，需要做MTT，WESTERN等实验，这需要考虑转染效率吗？怎么来判断转染效率呢?3、顺便问一下，抑制miRNA，就买个inhibitor和阴性对照就行了吧？还需要用阳性对照吗？4、转然后分别多久做MTT、Western、克隆形成实验以及流失细胞仪测细胞周期凋亡等？ ...

肝肝的发光鞋 目前在用慢病毒包装系统构建稳定高表达miRNA的细胞株，质粒是公司构建的，表达的是pre-miRNA。有一个问题，这个pre-miRNA能剪切成3p和5p两种成熟体，我体外瞬时转染做的是3p的功能，现在我转pre-miRNA进细胞后，我如何知道其发挥的功能是哪种成熟体的作用呢？或者，我想体内实验验证miR-3p的功能，用带pre-miRNA构建稳定细胞株，可以吗？求教高人。zmzpxsz 同问，帮顶下！zhuj ...