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        【求助】请教几个血液miRNA的问题

        丁香园论坛

        1631
        干了若干年临床刚开始做实验,一些弄不明白的问题,请坛内高人指点一些:
        ①做血液来源miRNA,qRT-PCR的内参到底用哪个比较好?文章里有U6、miR-16等,但有的文章互相有点矛盾。
        ②我的血清样品很少,每个都不到1ml。选择stem-loop逆转录好,还是poly(A)好?问了几个朋友,有的说stem-loop省RNA样品,有的说poly(A)省RNA,到底哪一个更节省一些?我如果poly(A)的方法逆转录,准备检测四个miRNA,是否逆转录后要把cDNA分成四份,各做一次qPCR?
        ③大家的经验,要检测四个miRNA指标,需要从多少血清中提取总RNA?
        你可以开始2个内参都选定,然后对于你特定的细胞系或者组织看看其稳定性到底选用哪一个。血清中miRNA的表达相对较低,但是对于TaqMan探针而言一个样品只需要5ng的总RNA量。,检测几个的表达已经足够了。
        谢谢版主!

        本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴

        师兄微信号:shixiongcoming

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