RNA实验技术

1.miRNA Map 是一个整合的数据，被开发用来存储已知miRNA 基因，假定的miRNA基因，已知的miRNA targets和假定的miRNA target.(Hsu et al 2006).2.已知的miRNA基因，来自人，小鼠，大鼠以及狗的miRNA基因，可以从miRNAase获得，试验已经证实的miRNA targets在文献中可以获得。3.假定的miroRNA precursors ...

DEPC有致癌性，不能处理Tris溶液等这些事项大家都知道，所以不谈。谈一些实验室中的操作误区。误区一：重复使用含DEPC的水处理枪头、离心管等。由于DEPC较贵，而且书上说DEPC要用高压灭菌处理去除，于是有些人就萌发了重复使用DEPC的想法，即对含有DEPC的水不进行高压灭菌，从而重复使用含DEPC的水处理枪头、离心管等。节约本是好事，但这样的节约是无效的。为什么不能重复使用含DEPC的水，因 ...

细胞内的核酸多以核蛋白的形式存在，其中脱氧核糖核蛋白主要存在于细胞核中，核糖核蛋白主要存在于细胞质中。这两类核蛋白在0.14mol／L氯化钠溶液中的溶解度相差很大。核糖核蛋白在此溶液中具有很高的溶解度、脱氧核糖核蛋白的溶解度却相当低。制成肝匀浆后，用0.14mol／L氯化钠溶液抽提，可将两种核蛋白分离。分离过程中加入少量柠檬酸钠，可抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的水解作用。 在含有核糖核 ...

1. 将酵母细胞培养在3ml选择性培养基中，30℃过夜旋转培养。2. 稀释过夜培养的菌液，重新在10ml培养基中培养细胞。3. OD600达到1.0时，收菌，4000rpm/min离心5min弃培养基。4. 将细胞悬浮于400μlAE缓冲液（50mMSodiumAcetate10mMEDTA调整pH值至5.2）。5. ...

与rRNA和tRNA不同的是，哺乳动物细胞的绝大部分mRNA在其3'端均有一poly(A)尾，因此可以用oligo(dT)－纤维素亲和层析法从大量的细胞RNA中分离mRNAdmonds等，1971;At Leder，1972）。在构建cDNA文库时， 必须经上述纯化步骤制备mRNA模板。进行Northern杂交或Sl 核酸酶作用图分析时，与总RNA相比，采用poly(A)+ RNA能获得更为满意的 ...

RNA的提取准备试剂：氯仿，异丙醇，75�乙醇，无RNase的水或0.5�SDS(溶液均需用DEPC处理过的水配制)操作步骤：1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎每50-100mg组织加入1ml TRIzol用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10�。b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸 ...

如何提取小小的miRNA（microRNA），各大生物技术公司均推出了自己的试剂盒，国内知名核酸纯化公司百泰克针对不同来源的样本亦推出了一系列拥有自己独特技术的miRNA（microRNA）提取试剂盒！

激活转录因子-5(Activating transcription factor-5,ATF5)在黑素瘤中高度表达，其可促进肿瘤细胞的存活。作者利用基因组规模的RNAi筛选方法，鉴定了ATF5的转录调节因子。

PS刺激可以引起PDCD4表达短暂增高，PDCD4表达增高具有两种意义：第一，通过结合于IL-10的mRNA，阻止延长因子与之结合而在翻译水平下调抗炎因子IL-10的表达；第二，通过抑制NF-κB上游分子IκBα的合成而增强NF-κB的活性，促进炎症介质IL-6的合成。因此，从这个角度上讲：PDCD4是促进炎症反应的因素。

中国科学院上海生命科学研究院健康科学研究所沈南教授领导的研究组整合上海交通大学附属仁济医院风湿科的临床优势和健康所的基础研究力量，继2009年在风湿病学领域最有影响力的杂志ARTHRITIS & RHEUMATISM上报道了miRNA作为负反馈调节分子在狼疮关键致病通路中起了重要作用后，近日又在国际学术期刊Journal of immunology发表了有关miRNA参与狼疮T细胞低甲基化调控的最新研究成果。该工作揭示了miRNA参与狼疮发病的新机制，为今后发展miRNA为靶点的干预治疗提供了重要依据。

点杂交和狭线杂交技术用于在同一固相支持物上固定几种核酸样品，然后用合适的探针与已固定的样品杂交，并由此判断靶序列的浓度。通过估计样品点发射出的信号强度，与已知浓度的标准品信号强度进行比较，确定待测样品中靶序列的量。现在的点杂交和狭线杂交一般用纯化的RNA样品。

多数情况下，为检测特定的靶mRNA，需先将RNA通过琼脂糖电泳分离后，再从胶上转移到二维支持物上（通常为尼龙膜），再与特异的标记探针杂交。本文主要介绍RNA在上行的缓冲液作用下从琼脂糖胶上转移至膜性支持物，然后采用不同方法将RNA固定在膜上进行杂交。

帮助将抑制因子tRNA交付到核糖体的翻译因子eIF2利用GTP水解的能量来发挥功能。另一个因子eIF5已知在当eIF2与抑制因子tRNA和核糖体结合时会加快eIF2的GTP酶活性。在这项研究中，研究人员确定了eIF5的另外两个作用。

多数情况下，为检测特定的靶mRNA，需先将RNA通过琼脂糖电泳分离后，再从胶上转移到二维支持物上（通常为尼龙膜），再与特异的标记探针杂交。本文主要介绍RNA在上行的缓冲液作用下从琼脂糖胶上转移至膜性支持物，然后采用不同方法将RNA固定在膜上进行杂交。

本文所述的是RNA提取的一步法的改进，可从少量组织和细胞中同时回收DNA、RNA和蛋白质。这种方法包括用含异硫氰酸胍和酚的一种单相液来裂解细胞，加入氯仿产生第二相，DNA和蛋白质在有机相中被抽提，RNA则被留在上层水相中。用乙醇和异丙醇连续沉淀可分别分离有机相中的DNA和蛋白质。

与rRNA，5SRNA,5.8SRNA和tRNA相比，大多数真核生物的mRNA在其3’端带有poly（A）尾巴，因此mRNA能用oligo（dT）-纤维素亲和层析法从细胞总RNA中分离。本文中介绍的方法是利用带有poly（A）尾巴的mRNA能与连在纤维素介质上的短链oligo（dT）形成稳定的RNA-DNA杂合链的原理。poly（A）+RNA能用oligo（dT）层析柱选择洗脱，也能分批洗脱，即批量层析的方法。

乙二醛化RNA琼脂糖凝胶电泳和含有甲醛的琼脂糖凝胶电泳均可按大小分离RNA。RNA样品经甲酰胺处理以及经含有甲醛的凝胶电泳分离可能会发生变性，但因为变性RNA比乙二醛电泳后的RNA在Northern分析过程中更易从凝胶上分离，因此甲醛凝胶电泳仍然是分离RNA的一个普遍采用的方法。然而，在甲醛凝胶上的RNA条带总是模糊不清，不能与乙二醛琼脂凝胶电泳的清晰条带相媲美。

新的研究首次显示了MicroRNA的能够沉默基因，从而保护基因组免于致癌突变。此项研究由俄亥俄州立大学综合癌症中心－Arthur G. James肿瘤医院和Richard J. Solove研究所研究人员所主持，结果表明，MicroRNA - 155（miR- 155）能够抑制某些基因的活性，这些基因通常能修复错误DNA配对所致的损伤。

microRNA的定量检测与功能分析方法，由QIAGEN公司带来更好的技术支持。讲座内容提要：microRNA研究背景知识介绍；基于SYBR Green real-time PCR的方法做miRNA表达量分析；通过miRNA的模拟物或抑制剂。

奥地利分子病理学研究所，德国Max Planck研究所分子细胞生物与遗传学实验室，Wellcome Trust Sanger研究所等多国的科研工作者在人类染色体分离蛋白研究方面取得新进展，相关成果文章Systematic Analysis of Human Protein Complexes Identifies Chromosome Segregation Proteins公布在Science在线版上。