RNA实验技术

真核生物的基因组是DNA，为什么不直接从DNA PCR得到我们需要的基因呢？因为真核生物的基因含有大量的非编码区，称为内元（intron），真正编码蛋白的区段是被这些内元隔开的，这些编码区叫做外元（exon）。真核生物的DNA转录成为RNA之后，经过剪切和拼接，去掉这些非编码区，才形成成熟的mRNA，由mRNA再翻译成蛋白质。所以，如果直接从真核生物的基因组DNA获取目的基因，克隆再表达，试图获取 ...

RNAi的定义： 目前对RNAi (RNA interference)的定义有很多种，不同的资料对其定义的侧重点也不尽相同，如果将RNAi看作一种生物学现象，可以有以下定义：① RNAi是由dsRNA介导的由特定酶参与的特异性基因沉默现象它在转录水平、转录后水平和翻译水平上阻断基因的表达。② RNAi是有dsRNA参与指导的，以外源和内源mRNA为降解目标的转基因沉默现象。具有核苷酸序列 ...

DNA，RNA和蛋白质是三种重要的生物大分子，是生命现象的分子基础。基因组织DNA中的基因通过转录为mRNA并进一步翻译为蛋白质，很多种类型的蛋白质在最终发挥功能时又经历磷酸化、糖基化、酶原激活等翻译后修饰。DNA的遗传信息决定生命的主要性状，而mRNA在信息传递中起很重要的作用。其它两大类RNA，rRNA和tRNA，同样在蛋白质的生命合成物中发挥不可替代的重要功能。因此，mRNA、rRNA、tR ...

1、细胞生长至足够数量。2、吸去培养液，加入适量胰酶消化至细胞变小变圆。3、加入培养液中止消化并吹打。4、移至离心管，1000转/分离心5分钟。5、倒去上清，加入适量PBS并吹打，离心；重复两次。6、倒去上清，加入适量1mlPBS并吹打，移至EP管，离心。7、加入1mlTrizol并吹打，迅速放至-80℃冰箱保存。 (责任编辑：大汉昆仑王) ...

鼠脑RNA提取、RT－PCR及GST融合蛋白纯化一．鼠脑RNA提取（1）RNA提取常用3种方法：A.异硫氰酸胍、氯化铯密度梯度分离植物RNAB.SDS－酚－氯仿法C.硫氰酸胍－酚－氯仿法在制备用于反转录PCR的RNA时最实用（2）总RNA的提取方法是基于RNA与其他胞内大分子在溶解性和沉降性上的差异得以实现的，提取基本步骤：1.破碎细胞2.RNase失活3.RNA去蛋白4.RNA与其他大分子的物理 ...

1、血液收集：最好用肝素抗凝，因为EDTA可能会对后续的pcr有影响，因为EDTA会螯合pcr反应中的Mg2+，也可以根据实验的具体要求看选择怎么样的抗凝。2、白细胞的分离：一般选择1.5ML新鲜的血液，或选取冷冻的5ML的血液（冷冻血液的保存：先液氮速冻，再置于-80°保存），或隔天的5ML的血液，就可以分离到比较多的白细胞了。可以选择溶红素（BD公司的）或红细胞裂解液按一定的比例（1：3或1： ...

一般注意事项一些RNA提取方法，在进行具体实验时，应根据研究对象的性质，提取核酸的用途而对上述方法在操作步骤和试剂使用量上作一定的修改。1、 在核酸提取时，为了增加细胞的裂解度，增加核蛋白复合体破碎度，以释放更多的游离核酸，在操作中常要用到溶菌酶和蛋白酶K，在确保没有核酸水解酶存在的前提下，酶反应时间越长越好。2、有时在使用蛋白酶时，为了抑制核酸水解酶的降解作用，可在蛋白酶缓冲液中用终浓度5mM的 ...

1）检测RNA 溶液的吸光度280、320、230、260nm下的吸光度分别代表了核酸、背景（溶液浑浊度）、盐浓度和蛋白等有机物的值。一般的，我们只看 OD260/OD280（Ratio，R）。1.8~2.0时，我们认为RNA 中蛋白或者时其他有机物的污染是可以容忍的，不过要注意，当你用Tris作为缓冲液检测吸光度时，R值可能会大于2（一般应该是2）RNA 的电泳图谱一般的，RNA 的电泳都是用变 ...

TRIzol RNA 提取试剂盒是由 GIBCO BRL 公司推出专供提取 RNA 的产品，其操作方便、快捷。（一）试剂准备 1 ． TRIzol 试剂。 2 ．氯仿 3 ．异丙醇 4 ． 75% 乙醇（ DEPC H2O 配制） 5 ． DEPC H2O（二）操作步骤 1 ． 样品处理： （１）培养细胞：收获细胞 1-5×10 7 ，移入 1.5ml 离心管中，加入 1ml Trizol ，混匀 ...

目的研究基因的表达和调控时，需要从组织或细胞中分离纯化RNA。RNA质量的高低常常影响RT-PCR、cDNA库构建和Northern Blot等分子生物学实验的成败。主要试剂Trizol是一种新型总RNA抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出 的核酸酶。1. Trizol试剂含有苯酚，具有毒性和刺激性，注意操作。2. RNase污染的主要来源是操作过程中手和空气中的浮沉，注 ...

1.DMSO：DMSO是二甲基亚砜，用途广泛。用作乙炔、芳烃、二氧化硫及其他气体的溶剂以及腈纶纤维纺丝溶剂。是一种即溶于水又溶于有机溶剂的极为重要的非质子极性溶剂。对皮肤有极强的渗透性，有助于药物向人体渗透。也可作为农药的添加剂。也是一种十分重要的化学试剂。DMSO也是一种渗透性保护剂，能够降低细胞冰点，减少冰晶的形成，减轻自由基对细胞损害，改变生物膜对电解质、药物、毒物和代谢产物的通透性。但是研 ...

实验一Total RNA的提取1.试剂配制准备工作:1研钵5ml/10ml/ 25ml移液管100ml/250ml量筒250ml/100ml容量瓶药匙 试剂瓶等玻璃制品均用锡纸包裹口部置于烤箱内180℃烤6小时.250ml/1.5ml离心管枪头等塑料制品用0.1‰DEPC水浸泡过夜后121℃ 20mins 高压灭菌.电泳槽及电泳托梳子用3%双氧水处理.4常用试剂及其配方:▲DEPC水:在1000m ...

问：我在配75%DEPC处理乙醇的时候把无水乙醇和DEPC处理的水按3:1混合后高压消毒.而不是事先将DEPC水消毒再加无水乙醇.如果液体没有挥发的话这样配的能用于抽提RNA吗?还有DEPC要经过好久高压才能无毒.在线等.请赐教网友A：我感觉没必要这样做，酒精本来就有消毒的功能，只要DEPC无菌就行了，我没这样做过，我想还是按常规的方法好。网友B：我感觉没必要这样做，酒精本来就有消毒的功能，只要D ...

防止RNA酶污染的措施：1、 所有的玻璃器皿均应在使用前于180℃的高温下干烤6hr或更长时间。2、 塑料器皿可用0.1% DEPC水浸泡或用氯仿冲洗（注意：有机玻璃器具因可被氯仿腐蚀，故不能使用）。3、 有机玻璃的电泳槽等，可先用去污剂洗涤，双蒸水冲洗，乙醇干燥，再浸泡在3% H2O2 室温10min，然后用0.1% DEPC水冲洗，晾干。4、 配制的溶液应尽可能的用0.1% DEPC，在37℃ ...

编者按：当我们屏着呼吸使用致癌的DEPC时，是否想过用一种既安全又省钱方法替代DEPC？看过本文，你一定会感慨作者的探索精神。其实，在生物吧，这样的探索还有很多。如果你嫌找得麻烦，那就先看看“牛人强文”吧！蛋白酶 K 的妙用，我曾经在别的论坛发表。坦率地说，蛋白酶 K 的这个用途，是我的得意之作之最。不是因为该发现有什么创新，而是因为它的实用性。当别人还在讨论 DEPC 有什么毒性，讨论那一家公司 ...

问：哪位大侠知道胰蛋白酶、胃蛋白酶和蛋白酶K的识别和切割氨基酸序列是什么？在哪里能查到蛋白酶的识别和切割氨基酸序列？谢谢！答：胰蛋白酶水解精氨酸或赖氨酸的羧基和别的氨基酸形成的肽键，而胃蛋白酶水解肽键两端必须为疏水氨基酸如Phe，Leu，Trp，Tyr但是如果是Pro不水解。蛋白酶K是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键。 (责任编辑：大 ...

植物RNA提取方法1. 取适量丹参材料于液氮中充分研磨，然后迅速转入1.5ml离心管中，立即加入异硫氰酸胍提取缓冲液600μl 和60μl 2M NaAc混匀。2. 向管中加入600μl酚∶氯仿∶异戊醇（25∶24∶1），涡旋混匀10s，冰上静置5min，4℃，12000g离心15min。3. 取上清于另一离心管中，加入等体积600&mu ...

什么是miRNA MicroRNAs （miRNAs）是一种大小约21—23个碱基的单链小分子RNA，是由具有发夹结构的约70-90个碱基大小的单链RNA前体经过Dicer酶加工后生成，不同于siRNA（双链）但是和siRNA密切相关。据推测，这些非编码小分子RNA（miRNAs）参与调控基因表达，但其机制区别于siRNA介导的mRNA降解。第一个被确认的miRNA是在线虫中首次发现的lin ...

RNA提取原理： 通过变性剂破碎细胞或者组织，然后经过氯仿等有机溶剂抽提RNA，再经过沉淀，洗涤，晾干，最后溶解。但是由于RNA酶无处不在，随时可能将RNA降解，所以实验中有很多地方需要注意，稍有疏忽就会前功尽弃。所有RNA的提取过程中都有五个关键点，即：样品细胞或组织的有效破碎；有效地使核蛋白复合体变性；对内源RNA酶的有效抑制；有效地将RNA从DNA和蛋白混合物中分离；对于多糖含量高的样品还牵 ...

植物和动物组织有很大的不同主要是其多糖及酚类化合物含量很多因与有必要注意如下几个方面.酚类化合物的干扰及对策：许多植物组织特别是植物的果实（如苹果、樱桃、李子、葡萄等）和树木类植物中富含酚类化合物。酚类物质的含量会随着植物的生长而增加。因而从幼嫩的植物材料中更容易提取RNA。此外，针叶类植物的针叶中多酚的含量比在落叶植物的叶子中要高得多。在植物材料匀浆时，酚类物质会释放出来，氧化后使匀浆液变为褐色 ...