RNA实验技术

如何选择基因敲除动物模型制备技术？ 动物模型是现代生命科学研究的重要工具，特别是基因工程小鼠和大鼠，在基因功能研究、人类生理病理机制研究及新药研发中起着不可替代的作用。近几年来，制备动物模型的基因修饰技术层出不穷，这不仅包括传统ES打靶、TALEN、CRISPR/Cas9， 还有TetraOneTM 基因敲除新技术。如此繁多的技术该如何选择？本文将对这四种技术的原理、特点、缺陷及未来发展趋势作系统的介绍和对比。1、 传统ES打靶 ...

Cas9技术从细菌的免疫系统，到一个众所周知的生物技术工具；从单一的一项敲除技术，到应用领域遍地开花，Cas9技术发展不可谓不快。到底有多快？看到13年14年那么多关于Cas9的nature、science、cell，我和我的小伙伴都惊呆了！Cas9技术广泛用于基因功能研究，到底有多广泛？说全能，我想不过分吧。不信？那就听我说说。研究基因功能，最常用的方法就是基因敲除、上调表达、下调表达、融合蛋白及做突变。说到基因敲除 ...

''这几天看到一个微信，科研不端将每年通报，或7年不得申国自然。前几天还看到，国自然资助的文章，全文公开。这对我们认真做科研的人来说，真是个好消息。''其实做科研，不管是出于什么目的，如果去做，那就按照科研的思路和要求，认真做好。虽然现在，很多人做科研并不是出于对科研的喜欢，而是工作的需要，生存的压力。我们改变不了环境，那么就改变自己。如何改变呢，拿出些时间，去了解科研，感受她的神秘，享受探索的乐趣。季博讲座和日志中给大家 ...

随着 RNAi 现象的发现和研究到 microRNA 成为全球生物研究者关注的热点，与其相关的各种概念不断刷新我们的认识，siRNA、shRNA、microRNA、pre-miRNA、pri-miRNA、microRNA mimic、microRNA inhibitor 、agomir、antagomir，各种 RNA 让刚刚接触 RNAi 的人头昏脑涨，那么，现在让我带大家认识一下他们各自有什么特点，有什么关系。siRNA 是 dsRNA 在 Dicer 酶作用下裂解成 21- ...

bingo816 一篇关于miRNA的文章值得分享bingo816 有什么见解的 一定留言啊龍崎 下来看看本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

wgqsdams 各位高手，我们想做miRNA的实验，通过qPCR的方法验证，现在我们自己有引物序列，想找个便宜又有保证的公司进行引物茎环部分的序列设计和合成，请各位高手给指点迷津。谢谢！！masmas 我合引物一般去上海英骏godsay5605 同样推荐英骏，我们合引物也是去他们家epdnge 广州锐博生物可以86964109 最近用上海生工合的，还可以本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法 ...

longchi 近来看了一些文献，被CDNA有关东西弄迷惑了，请求帮助解惑。1、cDNA是以mRNA为模板，经反转录酶催化，在体外反转录而成，其组成特点是其中不含有内含子和其他调控序列。有文献说“分析XX的cDNA可发现它有一个很长序列的3“ 非编码区域”，既然cDNA不含内含子和其他调控序列，为何还有非编码区域呢，非编码区域不属于内含子或调控序列吗？2、某基因有外显子1含362个BP，外显子2含150个BP，外显子3含1 ...

如来的观音 如题，谢谢zjubell 建议先google一下，至少有些基础的认识。原理其实很简单的，用一个带loop的引物去做逆转（单链也行，但带loop的效率会高一些）然后正向引物是特异性引物，反向引物其实是一条通用引物，与loop结合的。再用普通的sybr green直接定量PCR即可。一个样本，一个miRNA几百元其实比较贵了。提RNA，逆转，引物，我觉的50块钱么差不多了。当然，人力比较值钱。wangke80 费用还取决于 ...

钦文 我用人的外周血4ml分离淋巴细胞，计数约400万个细胞，分成两孔种到24孔板中，培养3天后提取淋巴细胞的RNA，由于红细胞较多，提RNA前用红细胞裂解液先处理了细胞的，操作严格按照说明书进行，我用的是Takala的Trizol，500ul，800ul，1ml的量都用过，但是每次做到加入异丙醇离心后均未见沉淀，用DEPC水溶解后跑电泳也没有条带，不知道是什么原因，RNA提不出来，实验没办法进行，着急啊，请大家帮我 ...

能nca 各位师兄师姐，我做RNA提取了，很多遍了，到现在也不出结果，不知道哪里出了差错氯仿的保质期是多长时间啊，我师姐说氯仿从08年就买了，会不是时间太长了啊？liubingood 氯仿、异丙醇等这些化学试剂性质比较稳定，通常在说明书上不写保质期的，理论上可以长期保存，但是对于开封和未开封要区别对待。未开封的试剂试剂瓶的密封并不一定很严，多少会受外界水分等影响；一旦开封了就尽早使用，外界污染的可能性就存在了。通常对于这 ...

xan36 各位大侠，我现在想验证下我的RNA是否为环状RNA。请问有何高招？我能想到的是用RNA酶进行消化，如果被消化了，那么就说明它不是环状的。那么请问，我该选用哪种RNA酶呢？hzfjy 这位大侠，你太牛了，两年前就开始研究环状RNA啦？我是最近刚开始接触的，我也想问这个问题，请问你现在有答案吗？如果有的话，请告之，万分感谢！bingshuangcom8 RNase Rdxy333721 楼上正解vanasil nature上的文 ...

能nca 我反转录的cDNA，跑了电泳，发现条带是一抹的，但是有三处看着比较明显的条带，我问了别人都说，cDNA的条带都应还是一抹的，没有特别明显的条带，我不知道自己的cDNA除了什么问题，有的人和我说是由污染，到底是怎么回事啊，有出现类似情况的师兄师姐们，帮忙解答一下原因出在哪里啊？nono1986 对总mRNA进行逆转录得到的cDNA是涂抹带的，那三条明显的条带应该是rRNA。能nca 哦，谢谢啊能nca 对了我还想问一下， ...

liliuri1231 本人课题需要检测Caspase3的蛋白及mRNA的表达量，众所周知，Caspase3的蛋白有前体（31KD）和激活体（17KD和12KD）之分，但是mRNA也有这种区别吗，如果有的话，我得qPCR的引物应该怎么设计，请大虾指教。shejun1000 liliuri1231 wrote:本人课题需要检测Caspase3的蛋白及mRNA的表达量，众所周知，Caspase3的蛋白有前体（31KD）和激活体（ ...

又忘了了 我们实验用miRNA转染后，下调了目的基因，但是转入miRNA inhibitor后，目的基因水平也是下调的，并且下调水平和miRNA相近，这个是什么原因造成的？难道是inhibitor凑巧也抑制了别的基因了吗？或是别的原因，请大哥大姐们帮帮忙啊，谢谢啦！又忘了了 自己顶一下，呵呵大鹏鸟 你的细胞转染效率如何？转染miRNA后干扰效率如何？如果转染效率低的话干扰效果，miRNA的inhibitor的封闭效果都不会好。 ...

yaoyao82986 想请教一下关于长链非编码RNA的基因多态性（SNPs）的研究方法，如何从已知的lncRNA中选择SNPs位点（pubmed数据库中好像很多lncRNA都没有多态性信息）？非常感谢各位啊！霍一刀hxs 将查询到的lncRNA序列输入http://genome.ucsc.edu/网站中的Blat选项，点击submit，再选择browser,图表中会出现SNPs位点。接下来就可以做SNPs分析了。wils ...

xthuangsui 小弟在做RT-PRC。样本来是SD雄性大鼠附睾精子悬浮液。这样的样本应该如何处理，提取RNA。飘渺的虫 普通用trozl法提取rna就可以吧，感觉上没有什么困难啊，主要是量要尽量一致大鹏鸟 先离心把精子沉淀下来，1000-4000转都可以，低转速精子活力更高点，然后再提取，按trizol说明书进行。或者可以用提取血液RNA的试剂盒来提取。qiagen有。ffly 可以用qiagen的RNeasy Kit系列来做 ...

微笑刺客521 我是想提取RNA，然后在反转录，最后做荧光定量PCR。我用的标本是Hep-2喉癌细胞株，试剂盒是Biomiga_EZgeneTM Biozol RNA kit，每次收集50ml培养瓶里面的细胞，但是总是提取不出来RNA，条带上面也没有，郁闷之极，求解~athena王 难道降解了？biolinkphilic 尝试用其它提取方法，不妨用传统的提取法或许有意想不到的效果。微笑刺客521 我感觉是不是我收集细胞的时候有问题啊~或者我 ...

qisanni05 请问 做一种microRNA逆转录用哪家公司的试剂盒性价比较高？谢谢您的帮助！大鹏鸟 不知道你要做啥？RT-PCR？国内挺多的，不过广州复能基因的貌似挺全、挺专业的。http://www.fulengen.com/product/reagent/qpcr_detect.phpAll-in-One First-Strand cDNA Synthesis Kit采用RNase H活性缺失的莫洛尼鼠白血病病毒反转录酶(M-MLV Rever ...

程程880309 求各位：我是研一学生，因课题组的研究方向是关于microRNA，请问用哪本书比较好？谢谢各位啦~~负极兔 友情帮顶smilewei15 马上读研，现在的毕设也是这个方向~~同求~~本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

freezingfall 请问战友有没有什么能常温将RNA携带的方法，求具体处理步骤，不胜感激freecell 方法1： 利用INVITROGEN的RNALATER试剂保存RNA。Room-temperature storage (18–25°C) in RNAlater is possible for up to 7 days according to manufacturer’s instructions, although significant mRNA degradation was det ...