RNA实验技术

RNA 抽提之应知应会背景介绍实验前方法/试剂的选择问题解答 (外源性污染导致的问题不在本解答考虑中)RNA 抽提的“三大纪律八项注意”Rnase 污染的10大来源RNase 和 DEPC 处理RNA 抽提的10大窍门提高 RNA 得率经典抽提小技巧特殊组织的抽提样品冻融的影响RNA 质量的判断RNAguard：使降解成为历史的试剂　背景介绍　对大部分实验人员来说，RNA 抽提比基因组 DNA 抽提要困难得多。事实上，现有的 RNA 抽提方法/试剂，如果用于从培养细胞中抽提 RNA ...

浏览核酸研究2006年数据库专刊的时候，发现了两个miRNA的序列数据库。miRNAmap:http://nar.oxfordjournals.org/content/vol34/suppl_1/index.dtlwhat is miRNmapWe establish genomic maps for microRNA precursors and their mapping to targets in vertebrate genomes, namely miRNAMap. In this s ...

RNA 的完整性可以通过琼脂糖变性电泳分析检测,而含量则通过紫外分光光度计确定。常见的变性电泳有甲醛变性电泳，戊二醛变性电泳等。3.1 甲醛变性电泳检测RNA完整性一、材料、试剂和仪器1 材料: 植物总RNA 5-10μg2 试剂:1）加样运载缓冲液（Loading buffer）50% 甘油1mmol/L EDTA (pH 8.0)0.25%溴酚蓝25%二甲苯氰FF2）10×TAE Buffer3）5×甲醛凝胶电泳缓冲液：0.1mol/L MOPs (pH7.0)40mmol/L ...

RNA提取的流毒非浅的经典误区（初学者的必看贴）最近碰到了好几个RNA提取的初学者来实验室学习如何提取RNA，对于如此简单的操作，却有如此多的人提取不出来，细问一下，原来他们的知识来源都是书本上或者网上的“RNA提取注意事项一类”的所谓经验，其实，他们提取不出来的真正原因，恰恰是他们严格遵守了所谓的经验，精力全放在不需要注意的地方，结果搞得自己很紧张， 真正需要注意的操作反而没有注意了。下面我就结合生物通上常见的R ...

在凝胶成像系统电脑上发现的东西。园里不没有。呵呵。帖一个分享一下。园里相关的方法还有：酵母总RNA提取 mRNA的分离技巧小麦总RNA的提取验证有效的多酚类植物(苹果,棉花)提取RNA protocolRNA提取,欢迎对其细节进行交流土壤DNA、RNA的提取 RNA 操作注意事项与实验技巧操作注意事项：　　由于RNA酶的广泛存在与难以灭活的顽固特性。使得RNA的提取纯化和后续工作变得非常困难。为了保证RNA的研究工作成功，请仔细阅读 ...

1998年Andrew Fire等首次发现并命名了RNA干扰(RNA interference，RNAi)。RNA干扰是指在真核细胞中引入双链RNA(double-stranded RNA)分子从而导致具有序列同源性的基因产生特异性基因沉默(gene silencing)的现象。属于转录后水平的基因沉默(post-transcriptional gene silencing，PTGS)。该技术的出现为功能基因组学、基因治疗学、药物开发等 ...

完整RNA的提取和纯化,是进行RNA方面的研究工作,如Nothern杂交、mRNA分离、RT-PCR、定量PCR、cDNA合成及体外翻译等的前提。所有ＲＮＡ的提取过程中都有五个关键点，即１）：样品细胞或组织的有效破碎；２），有效地使核蛋白复合体变性；３），对内源ＲＮＡ酶的有效抑制；４）有效地将ＲＮＡ从ＤＮＡ和蛋白混合物中分离；5），对于多糖含量高的样品还牵涉到多糖杂质的有效除去。但其中最关键的是抑制ＲＮＡ酶活性。RNA的 ...

RNAi介绍1. RNAi现象RNA 干涉（或者叫做RNA干扰）指的是细胞内由双链RNA诱导降解与其配对的特定mRNA的过程。在一些生物系统中，少量拷贝的双链RNA能导致细胞内所有同源基因的降解。这个现象在进化过程中保守而且广泛，许多基因在这个过程中发挥了重要的作用。 人们发现这个现象在线虫、昆虫、哺乳动物、植物和真菌中广泛存在。而在RNAi现象在线虫中发现之前，其机制被认为是一种转录后基因沉默，共抑制或者是压制，被认为是 ...

RNA提取和RT-PCR在做Northern等杂交实验、构建cDNA文库、获取能够编码真核生物蛋白的基因、获得RNA病毒基因时，会用到RNA提取和RT-PCR技术。真核生物的基因组是DNA，为什么不直接从DNA PCR得到我们需要的基因呢？因为真核生物的基因含有大量的非编码区，称为内元（intron），真正编码蛋白的区段是被这些内元隔开的，这些编码区叫做外元（exon）。真核生物的DNA转录成为RNA之后，经过剪切和拼 ...

最近利用trisol（Qiagen公司）进行肝脏病理标本RNA抽提，按照试剂的说明书进行操作：取小于50mg的RNAlater（Sigma公司）保存的样本，置于1ml的trisol中匀浆；匀浆结束后室温放置5min左右，加入200ul氯仿，以振荡器剧烈震荡15秒混匀，室温或冰上（此处各家说法不一，我自己测试好像没有发现很大差异）放置5-10min；4度，12000g离心15min，吸取上清至新的1.5ml离心管中；在 ...

RNA干涉（RNAi）1995年，康乃尔大学的Su Guo博士在试图阻断秀丽新小杆线虫（C. elegans）中的par-1基因时，发现了一个意想不到的现象。她们本是利用反义RNA技术特异性地阻断上述基因的表达，而同时在对照实验中给线虫注射正义RNA（sense RNA）以期观察到基因表达的增强。但得到的结果是二者都同样地切断了par-1基因的表达途径。这是与传统上对反义RNA技术的解释正好相反的。该研究小组一直没能给这个意 ...

小弟我这段时间因为实验需要,开始大量的提取脑组织的RNA.以前提取RNA都是做逆转录吊基因用,所以对于RNA的要求不算是特别严格.但是这次的实验要求RNA提取纯度和精度都比较高,所以对于RNA提取的结果也就比较关注.在前一段时间我提取RNA中一个比较明显的问题是在28s的上面会多出一条带,当时在本版上面问了很多战友,也看了相关的贴,发现这是一个比较普遍的问题,对于这条带的解释有些战友说是基因组残余,有些战友 ...

RNAi片段siRNA设计原则RNAi target selection rules:1.Targeted regions on the cDNA sequence of a targeted gene should be located 50-100 nt downstream of the start codon (ATG).2.Search for sequence motif AA(N19)TT or NA(N21), or NAR(N17)YNN, where N is any nucleotide, R is purine (A, G) and Y is pyrimidine (C, U) ...

1 Founding Members： Lin-4/let-7Ambros, V., and Moss, E. (1994) The heterochronic genes and developmental timing in C. elegans. Trends in Genetics 10, 123-127.Basyuk E, Suavet F, Doglio A, Bordonne R, Bertrand E. (2003) Human let-7 stem-loop precursors harbor features of RNase III cleavage products. ...

内容包括：1＝＝＝＝humanaebook：RNA Interference, Editing, and ModificationAbstract:A comprehensive collection of cutting-edge methods for elucidating the function of new genes and altering gene expression. These readily reproducible techniques can be used either in transient ...

自己总结的RNAi干预的癌基因 75条(有部分重复) 大家一起来补全吧 最近在考虑做哪个基因 所以顺便总结了一下 大家多提意见AML1/MTG8 (205)APE1 #3ATF2 #3Bax (202)bcl-2 Antiapoptotic Esophageal adenocarcinomaBCL-2,xIAP(138, 213)BCR-AbL (136, 137)B-raf Serine/threonine kinase Malignant melanomaBRAF(V599E) (206) ...

RNA干扰介绍 （2006年诺贝尔医学奖）据诺贝尔奖官方网站消息，10月2日当地时间上午11时30分(北京时间17时30分),瑞典皇家科学院诺贝尔奖委员会宣布将2006年度诺贝尔生理学或医学奖授予两名美国科学家安德鲁-费里和克拉格-米洛，以表彰他们发现了RNA干扰现象。费里和米洛将分享奖金。因此，搜集了一点相关资料与大家共同学习。请斑竹酌情加分。RNA干扰技术研究进展及其应用作者单位：云南农业大学动物科学技术学院， ...

组织RNA 抽提失败的两大现象是： RNA 降解和组织内杂质的残留。关于降解问题，首先看一下为什么从培养细胞中抽提RNA 不容易降解。现有的RNA 抽提试剂，都含有快速抑制 Rnase 的成分。在培养细胞中加入裂解液，简单的混匀，即可使所有的细胞与裂解液充分混匀，细胞被彻底裂解。细胞被裂解后，裂解液中的有效成分立即抑制住细胞内的 Rnase，所以RNA 得以保持完整。也就是说，培养细胞由于很容易迅速与裂解液充分接触，所以其RNA 不容易被降解；反过来讲 ...

刚在生物通网站上看见的东东，觉得很有用，就转贴过来。一旦生物样品被收集采摘，它的RNA会立刻变得非常不稳定，极易被降解。由于特异及非特异的RNA降解，或者由于应激反应产生新的RNA都会引起RNA状态的改变。对于生物芯片、基因表达矩阵分析（Array Analysis）、定量RT-PCR等实验来说，采样后立即稳定样品里的RNA以保存当时RNA的表达状态，是精确/定量研究基因表达分析的重要前提。为了达到这个目的，往往需要将 ...

RNAi药物，一针一百万？RNA interference RNA干扰 剂量 用量目前，用于动物实验的siRNA的通用剂量是10mg siRNA/公斤体重/每针。如果一个成人的体重是70公斤，那么一针就需要700mg siRNA。700mg siRNA多少钱？Qiagen目前的特别优惠价是0.15$/ug，Ambion的最低价格是0.19$/ug，Dharmacon的最低价格是0.12$/ug。按照这个价格，则700mg Qiagen的siRNA是1 ...