RNA实验技术

tigerbin 请教各位大侠：有没有研究microRNA与树突状细胞免疫功能方面的？现在microRNA的研究已经遍及肿瘤，免疫，心血管疾病，病毒等，如miR-155,有关它与免疫的研究，本人看的几篇文献主要是利用转基因技术敲除小鼠体内Bic基因（miR-155系BIC基因的表达产物，产生于活化的B细胞、T细胞、巨噬细胞、树突状细胞等），检测bic／miR-155-/-小鼠B,T,DC细胞分化，成熟，活化情况，及功能改变等。m ...

huangwenshu 请问“胱氨酸/谷氨酸反向转运体”的作用是什么，他的前体谷氨酸和半胱氨酸那个对他的作用影响较大？Fasta921 在生理状态下Glu/胱氨酸转运体（XC-）释放一分子的Glu，摄取一分子的胱氨酸入细胞内，两者藕联转运。胱氨酸在细胞内迅速被还原为半胱氨酸，一部分参与细胞内重要自由基清除剂谷胱甘肽的合成，另一部分则出细胞氧化成胱氨酸，重新参与XC-系统循环。在正常情况下，Glu与胱氨酸通过Glu/胱氨酸转 ...

redhq 各位高人，如何对microRNA和NF－kB的关系展开相关研究呢？freecell Refer to this paper:http://ukpmc.ac.uk/articlerender.cgi?artid=960261yfmxd 谢谢版主,正在读这篇文献,希望以后能跟您多请教,谢谢!本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

cancerlab 怀疑我所研究的mRNA一段约300bp的序列上结合了一个RNA binding protein，但是无从下手，不知道有什么方法可以将这个蛋白鉴定出来？望高手指教。Fasta921 可采用RNA与蛋白质相互作用实验，比如：EMSA （electrophoretic mobility shift assay）cancerlab 谢谢！ 不过我目前困惑的问题是，那上面结合的可能是哪个蛋白。不知道有没有合适的高通量的筛选方法或者信息学 ...

xshdao 因课题需要开展microRNA表达载体构建，查了一些文献好像很少有带GFP报告基因的microRNA表达载体，如pCDNA3.1。请问是否有带GFP的表达载体可以用了表达microRNA？请各位高手发表高见！freecell google: microrna expression vector with gfpwanghm200810 有这样的载体，还有带抗性基因的载体。geneyouth 用pEGFP -C3载体 就可以， pri-miR ...

mengxiaoyong 小弟要在绵羊上做RNAi，不知人源，鼠源U6或H1启动子在绵羊体内是否有功能？哪位大侠知道呀？先谢了！实验室里有U6或H1启动子载体！Fasta921 mengxiaoyong wrote:小弟要在绵羊上做RNAi，不知人源，鼠源U6或H1启动子在绵羊体内是否有功能？哪位大侠知道呀？先谢了！实验室里有U6或H1启动子载体！shRNA表达质粒多采用RNA聚合酶III启动子，如人源H1或鼠源U6启动子 ...

pl198242 请问shRNA表达载体在真核细胞中表达，一定要有真核表达的复制起始点么？ 如果只有PUC ori ，但是还有U6 启动子，是否就可以在真核细胞中表达shRNA了呢？ 这和f1 ori有什么关系么？ 由于对这方面了解很少，所以希望广大战友能予以帮助解答，谢谢！Fasta921 复制起点与启动子层面不同：PUC复制起点貌似原核复制起点啊，比如你转染前要获得大量的质粒，那么pUC origin 能保证该载体在大肠杆菌中的复制。U6启动子是确 ...

lily1314lk 本人需要自己构建质粒，遇到一个很头痛的问题，不知道如何利用blast对得到的shRNA进行同源性分析，有谁能指点一下，我做的基因是IKKα，有没有哪位同仁做过，可否提供shRNA靶点，谢谢freecell http://scholar.google.cn/scholar?q=IKK%CE%B1+shrna&hl=en&lr=&btnG=Searchzhaohu552211 进入到ncbi ，就可以了biowd 进入bl ...

huiguijimo 我想对培养的细胞进行RNA干扰，在干扰之前需要对细胞进行同步化吗？请各位高手指教Fasta921 干扰RNA是针对什么实验？细胞周期也许会涉及同步化吧！zhanglongfeng 只要不是研究细胞周期有影响的课题，就不需要。huiguijimo 想分别看一下干扰的那个基因对细胞周期和细胞凋亡及增殖情况的影响。需要同步化吗?Fasta921 huiguijimo wrote:想分别看一下干扰的那个基因对细胞周 ...

dengxiaoyu1221 本人用SMART试剂盒做cDNA文库，做到λ噬菌体cDNA文库向质粒cDNA文库转化的过程，不知什么原因全部失败，不知哪位大侠能提供λ噬菌体cDNA文库向质粒cDNA文库转化的详细方法过程，在下不胜感激dengxiaoyu1221 没有人为我解答么？freecell refer to:http://scholar.ilib.cn/A-QCode~jcst200601006.htmldengxiao ...

hzdlj 各位分子生物学大佬，本人目前才开始涉足miRNA，有诸多不懂之处，向各位请教。1，目前研究微生物miRNA多集中在病毒上，为什么真菌，细菌，支原体等研究较少，难道仅仅是因为基因组大小不同吗？2，查了下miRNA库，http://microrna.sanger.ac.uk/sequences/，似乎没有发现有关于真菌和某些细菌miRNA。请问：有没有这方面的生物信息学软件，根据微生物的基因组，预测其可能产生的miR ...

shuijingcrystyl 快答辩了，不知道E2F 的英文全称，因为所做指标与其有密切关系，求助转录因子 E2F 英文全称？freecell http://en.wikipedia.org/wiki/E2Fshuijingcrystyl 谢谢版主，授之以渔:I本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

sulicon 我想题目没说清楚。。。是这样的，我们做了一个方法，现在要检测这个方法的好坏，需要知道特定的miRNA的上调或者下调。我们希望能找到一些比较经典对某个miRNA调控的例子。经典的意思是：1. 这个调控比较可靠，大家公认。比如某个TF会激活某个miRNA的表达。2. 这个调控涉及的分子比较重要。比如上面例子里面的TF是P53。因为做的比较偏方法，要找具体的例子还一下子没有谱了，麻烦大家给点建议。谢谢！吴佰霖 鉴定调控mi ...

verycool 请问大家,用带GFP的逆转录病毒感染细胞后,如何检测GFP插入到细胞染色体的具体位置.我想知道的是如何确定其前或后的基因是什么?谢谢!小薇宝宝 这可是比较麻烦了，检测拷贝数可以用SOUTHERN BLOTING检测位置需要用图位克隆，用MARKER逐渐逼近然后确定位置lmnsmu 我认为检测其在染色体的具体位置，需要用原位杂交，常用的是FISH，但是大可不必检测其的染色体定位，检测GFP知道它在细胞内有无 ...

bbg966 请问Trizol 和β-actin的中文是什么呀？英文缩写呢？谢谢吴兴 Trizol是mRNA提取时的试剂名字，另一个我在查better8392 Trizol是一种提取总RNA的试剂名称。一般的生物公司都有卖，不过属invitrogen公司的产品用户较广，但是价格也较高。国内的也有，价格较低。也可以自己配制，配方是公开的。actin是肌动蛋白的意思，所以β-actin是一种肌动蛋白。因为β-actin基因是看家基因 ...

baoyuanfei siRNA沉默基因时间短， 48小时后能测蛋白表达情况吗？freecell 一般24~72H内检测蛋白表达情况。baoyuanfei 嗯，看文献都是48h测蛋白，但是每个基因表达为蛋白的时间应该是不一样的，不知现在有没有好的方法测出这种时间？威斯腾 主要侧什么时间sszfbj 没问题zenghong808 一般都是48-72h检测的本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可 ...

freedegree hsa-miR-625　和hsa-miR-62undefinedhsa-mir-532-5p 和hsa-miR-532-3phsa-mir-34a 和　hsa-mir-34b　　（同源？？）hsa-let-7a-2 和　hsa-let-7a-1　　（分布不同？？）晕了，赐教啊zhujoker hsa-miR-625　和hsa-miR-62undefined这2个第一个你应该清楚吧，hsa-miR-62undefined表示和前面那个互补的miRNA，于是就用了一个号标记。hsa-mir-532-5p 和hsa ...

quweiquwei 为便于学习和以后写作，建议xdjm们总结一下microRNA的大事，格式可以这样：1。1993年，Lee等人首先在秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)体内发现了长度为22 nt的非编码小RNA——lin-4,而lin-4 RNA便是现在所熟知的miRNA文献：Lee R C, Feinbaum R L, Ambros V. The C. elegans heterochronic gene lin-4 encodes small RNAs with ant ...

wywdxfsh 请问有没有什么网站可以分析microRNA在物种间的保守性？谢谢哈freecell see: www.scichina.com:8082/sciC/CN/article/downloadArticleFile.do?attachType=PDF&id=411501wywdxfsh freecell同学 你介绍的这篇文章写得真好 让我对课题原有的思路产生了新的想法 谢谢！myskite 看不到啊！liqiangs freecell wr ...

kunyushan 各位达人，在miR研究中遇到一个问题，想检测正常细胞和肿瘤细胞系中某miR的差别，有肿瘤细胞系，但正常细胞系未买到，且原代培养较困难，请问是否可用正常组织的miR含量与肿瘤细胞系进行比较？谢谢了freecell pubmed检索：“MiRNA PROFILE IN CANCER CELLS AND NORMAL CELLS”， 有很多paper可以解决你的疑问。例如：http://www.nature.com/cr/journal/v18 ...