DNA实验技术

外源DNA和质粒载体的连接反应外源ＤＮＡ片段和线状质粒载体的连接，也就是在双链ＤＮＡ５'磷酸和相邻的3'羟基之间 形成的新的共价链。如质粒载体的两条链都带5'磷酸，可生成４个新的磷酸二酯链。但如果质粒ＤＮＡ已去磷酸化，则吸能形成２个新的磷酸二酯链。在这种情况下产生的两个杂交体分子带有２个单链切口，当杂本导入感受态细胞后可被修复。相邻的５'磷酸和３'羟基间磷酸二酯键的形成可在体外由两种不同的ＤＮＡ连接酶催化，这两种酶 ...

本文就基因表达系统选择的原则做一粗略论述，抛砖引玉基因表达是基因工程的重要内容，是工业、医疗和基础研究领域的重要技术。基因表达系统按照基因表达宿主的性质分为原核表达系统和真核表达系统两类，前者主要包括大肠杆菌表达系统和枯草杆菌表达系统等，后者主要包括酵母表达系统、丝状真菌表达系统和哺乳动物细胞表达系统等。原核表达系统以大肠杆菌表达系统为代表，具有遗传背景清楚、成本低、表达量高和表达产物分离纯化相对简单等优点， ...

随着人类基因组（测序）计划（Human genome project）的逐步实施以及分子生物学相关学科的迅猛发展，越来越多的动植物、微生物基因组序列得以测定，基因序列数据正在以前所未有的速度迅速增长。然而,怎样去研究如此众多基因在生命过程中所担负的功能就成了全世界生命科学工作者共同的课题。为此，生物芯片，一项将计算机芯片制作技术与生命科学研究相结合的新兴技术应运而生了！　　计算机芯片的工作本质上是对0与1这二个数字以各种方 ...

真核细胞的mRNA在加工过程中有一个比喻为“穿鞋戴帽”的过程，因此mRNA的3'末端都带有一段Poly A，这是利用逆转录酶制备cDNA文库的基础。但是由于cDNA的5'端的序列各不相同，如何获得全长的cDNA，如何扩增由微量的mRNA逆转录得到的cDNA文库、如何利用已知片断序列得到全长的cDNA（即RACE），曾经是一个令人困扰的问题。常见的做法是在合成cDNA的双链后在两端连上接头，利用已知的接头序列再进行扩增 ...

第一章1,氨基酸（amino acid）：是含有一个碱性氨基和一个酸性羧基的有机化合物，氨基一般连在α-碳上。2，必需氨基酸（essential amino acid）：指人（或其它脊椎动物）（赖氨酸，苏氨酸等）自己不能合成，需要从食物中获得的氨基酸。3，非必需氨基酸（nonessential amino acid）：指人（或其它脊椎动物）自己能由简单的前体合成不需要从食物中获得的氨基酸。4，等电点（pI,isoelectric point）：使分子 ...

FISH检测要求使用中性福尔马林（不恰当的pH值会损伤DNA）固定24-48小时。固定时间不足会导致组织较软，在预处理过程中会丢失部分组织和信号。固定时间过长导致组织变脆，不利于切片，也会导致大分子交联情况严重，很难进行消化。福尔马林固定石蜡包埋的组织需要用蛋白酶进行消化以去除多余的组织来暴露细胞。如果消化不足（酶浓度低、温度不适合、时间太短），镜下会出现云雾状组织覆盖在细胞上，无法观测到暴露独立的细胞核，从而降低 ...

Methylation-Specific PCRProtocol written by James HermaundefinedMethylation-specific PCR (MSP) is a simple rapid and inexpensive method to determine the methylation status of CpG islands. This approach allows the determination of methylation patterns from very small samples of DNA, i ...

伸手党请注意：转帖请注明来自丁香园论坛1：NEBcalculator用途：计算载体连接比例，酶切位点和buffer的选择地址：http://nebiocalculator.neb.com/#!/2: Biomath Calculator用途：溶液稀释、溶液配制计算和核酸浓度的计算地址：http://www.promega.com/resources/tools/biomath-calculators/3：IDT sciTool用途：引物和 ...

基因克隆是指在体外将含有目的基因或其它有意义的Dundefined*段同能够自我复制的载体DNA连接，然后将其转入宿主细胞或受体生物进行表达或进一步研究的分子操作的过程，因此基因克隆又称DNA克隆、分子克隆、基因重组或重组DNA技术。基因克隆涉及一系列的分子生物学技术，如目的Dundefined*段的获得、载体的选择、各种工具酶的选用、体外重组、导入宿主细胞技术和重组子筛选技术等等。为了方便大家学习和交流，我以问答形式介绍基因克隆及其常见 ...

基因芯片技术及其应用　基因芯片(DNA Chip) 又称DNA 芯片、DNA 微阵列等等,是伴随人类基因组计划而产生的,是近年来分子生物学及医学诊断技术的重要进展。该技术的突出特点在于其高度的并行性、多样化、微型化、自动化,被认为是生命科学研究中继基因克隆技术、基因自动测序技术、PCR 技术后的又一次革命性的技术突破1 　基因芯片技术简介基因芯片将半导体工业的微型制造技术与分子生物学技术结合起来,通过把巨大数量的寡核苷酸、肽核酸或cDNA 固定 ...

转载，感谢原作者DNA测序常见英文单词对照（1）Quantitative analysis of expression of myocardial CYP11B1 and CYP11B2 genes in rats of two groups Taking 100bp Plus Ladder as Marker,clear amplified strands could be seen at 440bp?461bp and 336bp sites,DNA sequencing proved they were the encoding gene seg ...

以下是我构建载体的思路，但自己心里没底，不知是否可行，请各位老师指教!目 的：构建hPOT1正反义基因真核表达载体材料 DH5α大肠杆菌由学校细胞生物教研室提供；含全长hPOT1 cDNA的pLPCNMyc POT1质粒由美国Rockefeller大学的de Lange教授惠赠；pcDNA-3.1(－)真核表达载体购自美国Invitrogen公司；限制性内切酶BamHⅠ、Xho Ⅰ、Nhe I、T4DNA连接酶和牛小肠碱性磷酸酶（CIP）购自 ...

连接非常丰富，值得收藏：http://bioinformatics.vg/仅PCR就有很多内容：http://www.bioinformatics.vg/biolinks/bioinformatics/PCR%2520and%2520Primer%2520Design.shtml内容有：Sequence AnalysisManipulation, Search, Features, Retrieval, Alignment, Phylogeny ... ...

三院士PNAS杂志联合发表肝癌研究成果作者:何嫱 来源:生物通 发布者: 吴林寰 类别:新闻扫描近日，由中国科学院北京基因组研究所吴仲义所长及其科学团队与国立台湾大学医学院陈定信院士、陈培哲院士共同合作开展的“肝癌癌症基因组合作研究”计划获最新进展，相关学术论文在最新出版的《美国科学院院刊》（PNAS）杂志上发表。吴仲义教授早年毕业于台湾东海大学，1982年获得加拿大英属哥伦比亚大学遗传学博士，曾先后任职罗彻斯特大学和芝加哥大学 ...

核酸定量检测核酸的定量核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波长 260 nm。每种核酸的分子构成不一， 因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸，事先要选择对应的系数。如：1OD 的吸光值分别相当于50μg / ml 的dsDNA，37μg / ml 的ssDNA， 40μg/ml的RNA，30μg/ml的寡核苷酸。测试后的吸光值经过上述系数的换算， 从而得出相应的样品浓度。测 ...

以FAK为靶点的RNA干扰的黑色素瘤基因治疗RNA 干扰（RNA interference, RNAi）是由双链RNA 介导的序列特异性的转录后基因沉默现象。它通过识别与之序列相同的mRNA 来使特定基因在转录后水平被降解。RNAi 技术具有高的基因沉默效率和特异性, 为基因治疗等研究领域提供了一个新的研究手段。黏着斑激酶（FAK）是一种定位于黏着斑的非受体型酪氨酸激酶，参与调控细胞的运动和增殖等生命功能。FAK 在肿瘤的生成和恶化过程中 ...

我要开始做RFLP，需要买NEB的3种限制性核酸内切酶：RsaⅠ，DdeⅠ，BstUⅠ，但在NEB的网站上查到的这3种酶的说明却看不懂，因为不知道要买多少，所以也不敢买，急死我了！！！现在以RsaⅠ的说明为例，希望高手能解决我的燃眉之急，多谢了！！！Rsa I#R0167S 1,000 units $50 (USA)#R0167L 5,000 units $200 (USA)NEBuffer 1 2 3 4% Activity 100 100 50 1005´ ... G T^A C ... 3´3´ ... C A^T G ... 5´Source: An E. c ...

:(各位大侠：小弟最近做克隆实验遇到很大的障碍，已经连续三次失败了。请各位大哥帮助分析原因，小弟不胜感激！我克隆的是一个肿瘤标志物的基因片段，长约150bp 。具体过程如下：一，普通PCR，电泳，切下特异条带；二，用QiaGene公司胶回收试剂盒提取特异条带DNA，所得胶回收产物约30ul。取2ul做荧光定量PCR(该方法条件优化已完成)，证实胶回收产物中目的片段含量很高。三，用上海生工的PUCm-T载体试剂盒完成连接反应 ...

DNA或者PROTEIN序列分析的总思路，含网上软件希望对大家有帮助！此主题相关图片如下：Program FunctionBlastn Nucleotide query against nucleotide databaseBlastp Protein query against protein databaseBlastx Nucleotide query against protein databasePairwise blast Comparison of two nucle ...

Nonradioactive In Situ HybridizationApplication ManualTo select a chapter section, click on the corresponding page number.The chapters below are in Acrobat PDF format .Chapter 1General Introduction to In Situ Hybridization General Introduction to In Situ Hybridization 9I ...