DNA实验技术

1．电转化感受态细胞的制备1. 用枪头挑取单克隆菌落，投入盛有10ml LB液体培养基的50ml离心管中。（同时做培养基和枪头的空白对照）2. 37℃，220rpm，培养14-16个小时。3. 第二天，以1：100的比例将这10ml菌液倒入1000ml LB液体培养基中，37度，220rpm，振摇2-3小时，每半小时测一次OD，当OD值达到0.3-0.4时，停止培养。4. 将菌液在冰上预冷30分钟，随后将菌液分装到500ml 预冷的离心杯中，4℃，250 ...

【鸡毛蒜皮】之巧用PCR—重组质粒的快速高通量筛选近几年，随着国内更多的公司掌握了Taq酶的制备技术，市场竞争进入白热化，Taq酶的价格一路猛跌，有的公司甚至推出跳楼价—1毛钱一单位。且不说具体哪个公司的质量好，单单从价格上就已经让人感觉到了类似北京冬天的大白菜和夏天的西红柿的味道。从另外一个方面来看，限制型内切酶的价格却多年不变，我们曾经一度以价格优势占领大片国内市场并把内切酶普及到更多实验室的华美公司近几 ...

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带绦虫.ppt Download url: http://www.fs2you.com/files/53c9ffdc-1c06-11dd-abc6-0014221f3995/黑热病.ppt Download url: http://www.fs2you.com/files/95b8bf4f-1c06-11dd-90b5-0014221f3995/棘球蚴绦虫.ppt Download url: http://www.fs2you.com/files/8c6d1ee6-1c ...

版主，能否给我加分？第二章 从基因到基因组我们可以从多个层次来考虑基因和基因组图谱的绘制工作：一张连续的遗传图谱可以根据遗传重组频率来确定突变之间的距离（或是突变发生的位置）。它是通过对显形突变观察来确定的。因为根据遗传图上多点叠加所计算出来的遗传频率会有所偏差，而不能正确的表达基因特性。一张连续图谱也可以通过测定基因组DNA之间的重组来构造。这些断点会因为限制性内切酶的作用而产生不同的序列变化。因为这些变异 ...

随着人类基因组（测序）计划（Human genome project）的逐步实施以及分子生物学相关学科的迅猛发展，越来越多的动植物、微生物基因组序列得以测定，基因序列数据正在以前所未有的速度迅速增长。然而,怎样去研究如此众多基因在生命过程中所担负的功能就成了全世界生命科学工作者共同的课题。为此，建立新型杂交和测序方法以对大量的遗传信息进行高效、快速的检测、分析就显得格外重要了。基因芯片（又称DNA芯片、生物芯片）技术就是 ...

基因组信息学陈润生(中科院生物物理研究所，北京100101)当前人类基因组研究已进入了“功能基因组”阶段，即将发挥出巨大的社会效益与经济效益。科学家相信生物信息学将在这一研究中起着越来越关键的作用。生物信息学是把基因组DNA序列信息分析作为源头，在获得了蛋白质编码区的信息之后进行蛋白质空间结构模拟和预测，然后依据特定蛋白质的功能进行必要的药物设计。因此基因组信息学、蛋白质的结构模拟以及药物设计就构成了生物信息 ...

最近我正准备构建真核表达载体，涉及到在引物上添加酶切位点的问题，在园子里搜罗了好久，我把部分比较好的帖子整理了一下，欢迎大家补充或参与讨论（请求加分）。一，关于带酶切位点引物的设计和选择,希望以下的建议能对你有所帮助:1.要构建一个包含外源基因片段的质粒载体,所以在选择酶切上必须根据两方面共同选择:质粒多克隆位点区域包含的酶切位点以及您需要的外源性DNA片段上的酶切位点.在设计引物的时候,你所加上去的酶切位点必 ...

网上有两种pGEX-KG序列，请各位准备使用该质粒的朋友们注意啊！SEQ1Addgene_VectorDB_5100 pGEX-KG 5006 base pairsacgttatcgactgcacggtgcaccaatgcttctggcgtcaggcagccatcggaagctgtggtatggctgtgcaggtcgtaaatcactgcataattcgtgtcgctcaaggcgcactcccgttctggataa ...

Introduction to Biotechnology and Genetic Engineering by A. J. Nair | Publisher: Infinity Science Press | English | ISBN: 1934015164 | 1000 pages | 2008 | PDF | 7 MbDescription: Biotechnology is a rapidly-developing 21st century technology and interdisciplinary science that has already ma ...

“分子克隆”第三版有下面两段话： DNA 和 RNA 纯制品的 OD260:OD280 值分别是 1.8 和 2.0，若样品中蛋白或酚的污染较严重，则 OD260:OD280 低于上述两个数值 (p1695 倒数第 5 行)。水饱和酚在 270nm 处有特征性吸收，其 OD260:OD280 比值为 2 (p1697 的框内倒数第 2 行)。当时看到时就觉得这两段话是矛盾的；翻看英文版，发现没有翻译上的错误。难道真的会出现这样的现象：在 OD260:OD280 比值为 1.8 的纯 DNA 中加入比值为 2 的水饱和酚，则比值会小于 1.8？试图找 ...

我刚从生工测序回来，样品基因片段是用PCR扩增出来，约2.1Kb。扩增片段两端的酶切位点为Nhe1和Xho1，扩增这个片段的引物是这样：Ck-fullNX-F: 5' GTG CTA GCC ATG AAC AAT CCA TGG TC 3'Ck-fullNX-R: 5' GCG CCT CGA GCT ACA GAG ACT TAA AG 3'接在pcDNA3.1(+)的 Nhe1和Xho1之间。连接克隆后经酶切和PCR验证都完全正确。利用pcDNA3.1(+)的T7 promoter primer 和BGH引物从两端测序 ...

大肠杆菌的基因型野生的大肠杆菌具有大约4,700 kbp的DNA分子，上面有约2,800个基因。当这些基因中有突然变异发生时，基因产物随之变化，并且有可能给大肠杆菌带来可以观察到的变化。这种能够观察到的特征叫做大肠杆菌的表现型 (Phenotype)，而把基因的构成叫做大肠杆菌的基因型 (Genotype)。通常情况下，基因工程中使用的大肠杆菌的基因型只有在基因发生变异、表现型发生变化时才被表示。但是需要特别指出时, 则在野生 ...

打开峰图文件，依据图形初步判定测序质量，SAP酶纯化后的头峰杂度比较大，至少前50bp序列一般不可信，后续峰形如果还不错，主峰高、噪峰低、未见干扰峰，测序结果应该可信。一个正常的成功反应，能保证测序峰形清晰的长度为500 Bases (实际600 —800 Bases)。在进行DNA测序时，紧接引物的10 — 30 Bases有时不一定能完全读清楚。 由于DNA结构上的原因，有时会出现反应中途无法进行之情况。如：G/C rich; G/C Cluster；Po ...

Southern Blot ProtocolsSouthern Blot Protocol Southern blot和Northern blot （交流）精彩southernblot FLASH Southern 杂交操作规范及污染防护 要Southern PPT吗？Southern Blot 问题 Southern 杂交的高手之见 Southern转膜的方法求助 用southern blot鉴定转染基因时遇到的一些问题 转基因检测老是失败，可能原因有那些呢？ 请教southern blot ...

亚基因组的定义一，这是别人问我的两个问题的回答词：1.什么是亚基因组？我查到一些资料：披膜病毒科（Togavride）病毒，其下4个属，其中一个属是甲病毒属（Alphavirus）,其Genome是单链（+）RNA,其单独即可引起完整的复制周期。而其Genome 3’末端后1/3编码数种病毒结构Propeins,含4100个核苷,这一区域也称为亚基因组mRNA(subenomic RNA),或称为26S mRNA,此区域编码病毒结构 ...

转染求助http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/204073_1.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs/thread/719072http://www.dxy.cn/bbs/thread/1153373http://www.dxy.cn/bbs/thread/501069http://www.dxy.cn/bbs/thread/1479097共转染问题http://www.dxy.cn/ ...

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在园中看到有些战友对质粒提取的问题有些误解。现把我找到的关于质粒提取的原理列在下面，希望对大家有所帮助。碱裂解法从大肠杆菌制备质粒，是从事分子生物学研究的实验室每天都要用的常规技术。可是我收研究生十几年了，几乎毫无例外的是我那些给人感觉什么都知道的优秀学生却对碱法质粒抽提的原理知之甚少。追其原因，我想大概是因为《分子克隆》里面只讲实验操作步骤，而没有对原理进行详细的论述。这是导致我的学生误入歧途的主要原因。后 ...

国外癌症基础研究的主要进展黎彬 随着人类基因组计划的完成，加快了癌症分子水平研究的发展，本文对最近国外癌症分子水平的主要研究进展进行了分析。阐述了癌细胞作为侵袭性细胞所具有的6大特性。细胞癌变过程中关键的癌基因和抑癌基因如何发挥作用以及对抗癌治疗的影响。现代癌症基础研究的发展能够为癌的诊断和治疗提供更多途径以及更新的发展思路。通过癌症的基础研究为现代癌症治疗医学带来创新科学思维和行而有效的科学方法。1．有发展 ...