DNA实验技术

〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓 2007年零应助帖/疑难帖集合〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓 已应助帖不代表求助已经解决，鼓励战友继续积极应助，加分机会与尚未应助帖均等不规范贴不在此次整理范围，请大家规范发贴1.请问pcDNA3.1能作为RNAi的质粒载体使用吗？http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=64&id=9188774&sty=1&tpg=32&age=02.点突变没结果http://www.dxy.cn/bbs/post/view?b ...

题录集：静脉大容量快速注射siRNA或质粒有些老师曾经认为通过小鼠尾静脉注射200微升质粒液体都很困难。而现在，小鼠尾静脉注射1.3毫升的siRNA或质粒已经快成了在整体动物水平快速鉴定某个基因功能的标准手段。这种大容量快速注射还可以用于兔子、狗等大型动物。除了尾静脉是可以输入核酸的路径之外，还可以通过门静脉、肾静脉、下肢静脉等进行局部灌注。所以，以前用于反义核酸(ODN)的一些体内delivery手段，还可以 ...

【公告】丁香园网站捐款计划书转自：http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=21&id=193347&sty=1&tpg=1&age=0一、丁香园网站现况简介及远景规划丁香园网站始建于2000年7月，现在使用的域名为http://www.dxy.cn，目前主要致力于医学、药学、生命科学等专业信息服务，探讨相关专业知识，提供互联网优秀资源等。丁香园网站经过近三年的发展，目前已经储备了大量优秀专业人才资源 ...

核蛋白提取：（1）5 millions个离心收集（2）弃上清，细胞沉淀重悬于1.5ml冰预冷的PBS缓冲液，4℃下2000 rpm离心5min。（3）弃上清，沉淀重悬于500μl冰预冷的Buffer A离心收集，再悬于0.5 ml Buffer A。（4）冰上放置10分钟，加入NP40使终浓度为0.5%，混匀后，轻摇20秒。（5）4℃下1330×g离心15分钟得到细胞核。（6）重悬于50µl Buffer B，于冰上强烈振荡15分钟，4℃下16300×g离心10 ...

刚进实验室学技术 ，看到复旦大学某教授写的有关质粒的好文，贴在这里与大家共享（最后的问题也希望各位能解答一下：）：从质粒抽提谈起碱裂解法从大肠杆菌制备质粒，是从事分子生物学研究的实验室每天都要用的常规技 术。可以我收研究生十几年了，几乎毫无例外的是我那些给人感觉什么都知道的优秀学生 却对碱法质粒抽提的原理知之甚少。追其原因，我想大概是因为《分子克隆》里面只讲实 验操作步骤，而没有对原理进行详细的论述。这是导致我的学生误入歧途的 ...

（一）外源ＤＮＡ和质粒载体的连接反应　　外源ＤＮＡ片段和线状质粒载体的连接，也就是在双链ＤＮＡ５'磷酸和相邻的3'羟基之间 形成的新的共价链。如质粒载体的两条链都带5'磷酸，可生成４个新的磷酸二酯链。但如果质粒ＤＮＡ已去磷酸化，则吸能形成２个新的磷酸二酯链。在这种情况下产生的两个杂交体分子带有２个单链切口，当杂本导入感受态细胞后可被修复。相邻的５'磷酸和３'羟基间磷酸二酯键的形成可在体外由两种不同的ＤＮＡ连接酶催化，这两 ...

随着人类基因组计划的顺利进行,越来越多的新基因被发现,基因功能研究成为生命科学领域中的重大课题,目前基因功能研究方法主要有基因转导、反义技术、转基因和基因剔除、染色体转导、RNA 干涉等。一、正常情况：DNA→mRNA→蛋白质→功能（遗传效应以及表型）二、基因功能研究策略：1、基因功能的获得（gain-of-function）如：GFP转基因鼠1）、基因转移（transgenic）：(1)、 指外源基因导入受体细胞后能随即整合到受体的 ...

蛋白标签（protein tag）是指利用DNA体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。随着技术的不断发展，研究人员相继开发出了具有各种不同功能的蛋白标签。一、 新型蛋白标签蛋白标签应用极为广泛，但仍有两个问题不容忽视：（1）蛋白标签以DNA形式编码，它需要转录并翻译成蛋白后才能发挥作用，而这种作用方式本身就是一种缺陷。例如，常用的荧光蛋白标签，在显微镜下观察时，其显 ...

今天老师让我找一些比苯酚氯仿抽提法更简单的方法。通过专利文献和杂志，发现了一些简单的方法。现小结一下---血清中病毒DNA的提取一 煮沸法从血清中提取病毒DNA，与其它方法比较，此法最为简单，并且很多文献都有报道 。鲁艳芹等在一篇名为《乙型肝炎病毒荧光定量PCR检测方法及专用试剂盒》专利(专利申请号为200610044679)中对六种方法提取血清中乙型肝炎病毒DNA的效率做了比较，得出结果是：NaOH裂解法最佳，其次是直 ...

:)A腺苷脱氨酶缺乏症Aadenosine deaminase deficiency (ADA)定义：一种严重的免疫缺陷症，腺苷脱氨酶的缺乏可使T淋巴细胞因代谢产物的累积而死亡，从而导致严重的联合性免疫缺陷症（SCID）。通常导致婴儿出生几个月后死亡。腺嘌呤Adenine (A)定义：一种含氮碱基，是碱基对A-T（腺嘌呤-胸腺嘧啶）的一部分。腺病毒adenovirus定义：一组导致呼吸道疾病(包括常见的引起感冒)的DNA病毒。腺病毒 ...

长期以来，肿瘤一直是严重威胁人类健康的重大疾病。目前，我国有恶性肿瘤患者约450万人，死亡率超过30%，而且每年新增的患者人数高达200万以上。然而，目前临床上治疗肿瘤的传统方法，如手术切除和放、化疗，对多数肿瘤的疗效有限，且始终未能彻底解决肿瘤复发和转移的问题，提示这些治疗手段很可能未靶向肿瘤发生发展的关键环节。新近的研究发现，部分肿瘤组织中存在少部分特殊细胞，被称为旁群细胞或SP细胞(side population ...

1. National Center for Biotechnology Informationprovides GenBank, Molecular databases, Literature, Genomic biology, Tools, Research at NCBI.http://www.ncbi.nlm.nih.gov资源类型：机构2. The Genome DatabaseThe Genome Database stores and curates genomic mapping submitted by ...

利用DHPLC 基因扫描技术进行深入彻底的突变与SNP 筛查Stan L Lilleberg变性高效液相色谱（DHPLC）是一种新型遗传变异筛查技术，可用于单碱基替换（或单核苷酸多态性），小片段缺失或插入等多种基因突变的检测。DHPLC 基因扫描技术可在生殖细胞系和体细胞系中筛查遗传变异。而像特定位点DNA甲基化状态的改变等遗传现象也可用在DHPLC基础上建立的方法来检测。遗传变异的生物学效应是由突变基因的位置和特点决定的，而 ...

总有同学分不清荧光与萤光的概念，导致犯了很低级的错误，例如有人问我，为什么我把pGL转染细胞，荧光显微镜下看不到荧光那？又比如 做双荧光素检测时能不能用酶标仪检测，或者该用什么仪器测那？这都是分不清荧光与萤光的区别导致的。本文只给刚入门的师弟师妹看，大神们不要笑话。荧光，英文fluorescence，是指绿色荧光蛋白以及其变体（EGFP,CFP,ECFP,YFP,EYFP,DsRED等等）在收到激发后发射出的特定频率的光 ...

第一章 质粒DNA的分离、纯化和鉴定第一节 概 述　　把一个有用的目的DNA片段通过重组DNA技术,送进受体细胞中去进行繁殖和表达的工具叫载体(Vector)。细菌质粒是重组DNA技术中常用的载体。　　质粒(Plasmid)是一种染色体外的稳定遗传因子,大小从1-200kb不等,为双链、闭环的DNA分子,并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中，它具有自主复制和转录能力,能在子代细胞中保持恒定的拷贝数,并表达 ...

DNAstar---综合性序列分析平台生物谷提供下载 www.bioon.com，感谢原整理作者GETTING STARTEDIntroductory Tour of the LASERGENE SystemMAY 2001DNASTAR, Inc.1228 South Park StreetMadison, Wisconsin 53715(608) 258-7420Copyright . 2001 by DNASTAR, Inc.All rights reserved. Reproduction, ada ...

在核酸的研究中我们总会遇到这个问题：将一段RNA序列中的U改写成T。将一段5’-3’的序列反过来书写成3’-5’。以及求一个片段的互补序列。这些事情是很简单的，但是十分消耗精力，U变T可以用Word轻松实现，反写序列据说用Excel可以实现，互补序列用各种引物设计软件。或者引物设计软件可以解决以上所有问题，但是操作还是不够简便，需要反复粘贴。这令需要设计大量引物的我深感不悦，以至于操起高中的VB课本自己编写了一个软件 ...

五十多本Humana的电子书高速下载,请大家多多支持哟!http://mamb.dvo.ru/lib/mol-methods2/abc of clinical genetics.rar 06-Aug-2003 15:17 1.6Man introduction to computational biochemistry.rar 06-Aug-2003 15:29 6.3Mantibody phage display.rar 07-Aug-2003 10:32 2.5Ma practical guide to ...

http://mededucation.bjmu.edu.cn/mc3/molecular%20clonging%203.pdfTable of Contents：Chapter 1: Plasmids and Their Usefulness in Molecular CloningChapter 2: Bacteriophage and Its VectorsChapter 3: Working with Bacteriophage M13 VectorsChapter 4: Working with Hi ...

在生化区引发了一篇关于AO和EB染色细胞DNA的文献，应该发在这区比较合适，这里做基因的人肯定很多，和各位交流一下，EB为啥都传得那么可怕，我从来没有查到关于EB对于哺乳动物致癌的文章，反而找到了不少文献证明了EB根本无法穿透正常完整细胞膜，也就无从插入正常活细胞的DNA，更谈不上传说中的强致癌。以下是文献，大家还可以去自己搜索，另外，让我担心的是现在很多实验室都用国产核酸染料代替EB，有些核酸染料其实就是AO ...