我们将如何应对海量的基因信息新一代测序技术带给人们大量遗传信息的同时,却成为限制其广泛应用的一个障碍。1980年,英国生物化学家Frederick Sanger与美国生物化学家Walter Gilbert建立了DNA测序技术并获得诺贝尔化学奖,至今已有近三十年了。在这三十年,DNA测序技术取得了令人瞩目的进展。目前已进入市场的循环阵列测序平台采用的是与Sanger生物化学测序方法完全不同的原理。在过去几年,应用极 ...
核酸序列的一般分析流程1.1 核酸序列的检索http://www.ncbi.nlm.nih.gov:80/entrez/query.fcgi?db=Nucleotide1.2 核酸序列的同源性分析1.2.1 基于NCBI/Blast软件的核酸序列同源性分析http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast/blast.cgi1.2.2 核酸序列的两两比较http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gorf/bl2.html1 ...
第一章 质粒DNA的分离、纯化和鉴定第一节 概 述 把一个有用的目的DNA片段通过重组DNA技术,送进受体细胞中去进行繁殖和表达的工具叫载体(Vector)。细菌质粒是重组DNA技术中常用的载体。 质粒(Plasmid)是一种染色体外的稳定遗传因子,大小从1-200kb不等,为双链、闭环的DNA分子,并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中,它具有自主复制和转录能力,能在子代细胞中保持恒定的拷贝数,并表达 ...
RNAi这个东西蛮新的,也是比较难理解的。所以做这个题目的整理工作难免闹笑话,请大家多多指正。今天,武汉的DXYer小聚一下,感谢lad莅临武汉促成了这次聚会。同时也感谢lad把召集的重任交给我。我更加感谢能来捧场的武汉朋友们。同时感谢对此次活动关注的朋友,我就不一一列举他们的名字了。我希望以这一帖送给所有的关心我、爱护我、教育过我、帮助过我的朋友。谢谢你们!(时间问题,我没有整理成超链形式,但并不影响大家检索,不好 ...
EB(溴化乙锭)到底有多毒?随着每年各类化学物质进入市场,产生残留物的数量不断增加,健康和环境成为日益关注的问题。虽然许多实验中使用的化合物是有毒的,很多都是潜在的危险,但一些化学品没有适当的危险性分类,在日常实验中被广大科研工作者所忽略。什么是EB溴化乙锭?在研究数以千计的实验室残留性有毒物质,最值得一提的就是溴化乙锭(EB;3, 8-二氨基-5-乙基-6-phenylphenanthridinium甲基溴),该物质的潜 ...
到医院实习之前,我有幸跟随我的恩师,利用课余时间做了两年多的基础科研。从不懂规矩到渐入佳境,期间学习了很多东西,在此感谢我的恩师!我们是生物化学教研室,这两年的时间里我做了很多生化方面的实验。像细菌培养、细胞培养、PCR、western-blot、MTT测细胞增殖能力,这些实验都有商品化的试剂和推荐的操作方法,做起来,难度并不大。唯独让我感到苦恼的就是ShRNA表达质粒的构建这部分,它耗费了我们很多的精力,虽然最终 ...
原位杂交的教程及问题分析,可以帮助分析杂交试验失败的原因.目录第一节 原位核酸分子杂交技术的发展?第二节 原位杂交技术的基本方法?(一)固定?(二)玻片和组织切片的处理?(三)杂交?(四)杂交后处理?(五)显示?(六)对照实验和结果的判断?第三节 原位DNA和DNA分子杂交方法?(一)地高辛(Dig)标记DNA探针在石蜡切片检测病毒DNA的方法?(二)生物素标记HPV-DNA探针在石蜡切片上检测HPV-DNA的方法?第四节 RNA原位核酸杂交方 ...
本人经常用以下方法提取DNA,做PCR,效果不错,很简单.大家可以尝试下!整个过程不需要离心.1. Lysis: the lysis buffer (usually 0.5ml) is added to the tissue or cell ( for a 75cm2 flask, add 5ml directly to the cell). Digestion is complete within several hours at 37C (cell, 2-3h) or 55C (tissue) with agitation.Lysis buffer100mM Tris Hcl pH ...
在网上看到的,和大家分享一下。如果有错误,希望大家能指正~Vector:Primer(F);Primer(R)pACT T7 T3pACT2 GAL4 AD pACT2-RpAS2-1 GAL4 BD pAS2-1.RpB42AD pB42ADF pB42ADRpBACPAK8 BAC1 BAC2pBK-CMV T7 T3PBS(SK/KS)/M13- M13F/T7 T3/M13RpBV220 PBV220F PBV220RpCAMBIA 1301(1300) P1 P2pCAMBIA 2300 M13R(-4 ...
本人刚刚开始做DNA抽提实验,遇到一些问题,请教大家。1)关于酚的PH值。我从公司买了一瓶tris饱和酚,略呈黄色,分上下两层。上层水相,下层是酚。我测了PH值,上层PH值是8,下层是5左右,我用试纸测的,没敢拿PH计测。问题是分子克隆那本书上说酚用tris平衡至PH值8.0,可是现在买的酚却是酸性的,怎么办呢?是自己再用tris平衡还是直接就能用啊?请有经验的战友解答,可能问题很菜,呵呵,谢谢大家帮忙。2)提取细胞DN ...
问题:原因解决办法DNA完全没有被内切酶切割:1) 内切酶失活标准底物检测酶活性2) DNA不纯,含有SDS,酚,EDTA等内切酶抑制因子将DNA过柱纯化,乙醇沉淀DNA3) 条件不适(试剂、温度)检查反应系统是否最佳4) DNA酶切位点上的碱基被甲基化换用对DNA甲基化不敏感的同裂酶酶解,重新将质粒DNA转化至dcm-,dam-基因型的细菌菌株5) DNA酶切位点上没有甲基化(如Dpn I)换用不同切割非甲基化位点的同裂酶消化DNA(如S ...
重组质粒一月有余,颇有心得,与各位战友分享如下:1:关于双酶切的Buffer,一直是酶切的重点。有人喜欢A酶切完回收再B酶切,其实可以通过NEB网站上查询大部分双酶共切的Buffer问题,常见的双酶搭配甚至可以找一本TAKARA或者其他公司的Catalog,内切酶部分在前面肯定就有双酶切的Buffer推荐表。有些酶没有搭配的推荐,但是有各种酶在L,M,H,K及T+BSA的相对活性,AB两酶选一个合适的即可。注意尤 ...
〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓 2007年零应助帖/疑难帖集合〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓已应助帖不代表求助已经解决,鼓励战友继续积极应助,加分机会与尚未应助帖均等不规范贴不在此次整理范围,请大家规范发贴请大家在发帖前仔细阅读版规,细心搜索文献资料及丁香园内部后再发求助帖,以减少版主和其他热心战友的工作量.谢谢!1.【求助】T4 DNA Pol 补平http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=64&id=9229803&sty=1&tpg=25&a ...
在pubmed上找c-myc的序列,结果出来下面的结果,好像不是我要的,怎么回事?NM_078467 LinksHomo sapiens cyclin-dependent kinase inhibitor 1A (p21, Cip1) (CDKN1A), transcript variant 2, mRNAgi|17978494|ref|NM_078467.1|2: NM_010128 LinksMus musculus epithelial membrane protein 1 (Emp1), mRNA ...
Re:cDNA文库构建问题http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=729416BAC文库构建完全手册,无私奉献!欢迎下载!!!http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=64&id=969664这是我们常用的建基因组文库的流程,与大家分享。如有不足,尚请指正!http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=64&id=895823cDNA文库建库流 ...
第三张“基因变异图谱”与第二代基因组测序技术——评“千人基因组计划”首期研究成果的医学意义世界上任意两个人的基因99%都是相同的,而恰是那1%不同,负责着个体间的表型差异。《自然》杂志近期披露,当人体内携带有250到300基因变异位点的时候,相关基因就就会“沉默”。甚至,一个人只携带了 50到100基因变异位点,就可能患上某种疾病。10年前,“人类基因组计划”这一耗资30亿美元、历时10余年的伟大科学工程完成之际,人们以为得到 ...
我来整理生物芯片方面的资料第一部分 基础知识制造基因芯片的公司http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=64&id=1824869&sty=3&keywords=%BB%F9%D2%F2%D0%BE%C6%AC介绍基因表达谱芯片的课件http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=73&id=1817417&sty=3&keywords=%BB%F9%D2%F2%D0%BE%C6%AChttp:/ ...
本人持有以下载体及基因:(原则上只交换不赠送,欢迎广大站友互通有无)QQ 2283524599 luckamily@126.com一、载体1)、miRNA载体Promega miRNA靶标克隆载体 psiCHECK-2 psiCHECK2 ampAmbion miRNA靶标克隆载体 pmiR-report pmiRreport ampInvitrogen miRNA过表达载体 PCDNA TM 6.2-GW/EmGFP-miR2)、哺乳动物/真核表达载体pcDNA3.1+ 不 ...
从质粒抽提谈起复旦大学生化与分子生物学实验室碱裂解法从大肠杆菌制备质粒,是从事分子生物学研究的实验室每天都要用的常规技术。可以我收研究生十几年了,几乎毫无例外的是我那些给人感觉什么都知道的优秀学生却对碱法质粒抽提的原理知之甚少。追其原因,我想大概是因为《分子克隆》里面只讲实验操作步骤,而没有对原理进行详细的论述。这是导致我的学生误入歧途的主要原因。后来我发现其实是整个中国的相关领域的研究生水平都差不多,甚至 ...
对于一些生物测序公司( 如Invitrogen等),我们的菌液或质粒经过PCR和酶切鉴定都没问题,但几天后的测序结果却无法另人满意。为什么呢?PCR产物直接进行测序,在PCR产物长度以后将无反应信号,机器将产生许多N值。这是由于Taq酶能够在PCR反应的末端非特异性地加上一个A碱基,我们所用的T载体克隆PCR产物就是应用该原理,通常PCR产物结束的位点,PCR产物测序一般末端的一个碱基为A(绿峰),也就是双脱氧核甘酸 ...