DNA实验技术

TRIzol试剂适用于从细胞和组织中快速分离RNA。TRIzol试剂有多组分分离作用,与其他方法如硫氰酸胍/酚法、酚／SDS法、盐酸胍法、硫氰酸胍法等相比，最大特点是可同时分离一个样品的RNA\DNA\蛋白质．TRIzol使样品匀浆化，细胞裂解，溶解细胞内含物，同时因含有RNase抑制剂可保持RNA的完整性。在加入氯仿离心后，溶液分为水相和有机相，RNA在水相中。取出水相用异丙醇沉淀可回收RNA；用乙醇沉淀中间层可 ...

无意中看到,觉得不错,拿来与大家分享,内容包括:Useful resources:Blocking with immunizing peptide protocol (BL)Buffers and stock solutionsFluorophore tableTroubleshooting tipsImmunohistochemistry (IHC) / Immunocytochemistry (ICC) protocols:IHC-Fr staining protocolI ...

2013年诺贝尔生理或医学奖落花落“基础研究”，无疑给了大家一剂兴奋：在最基础的研究上，坚持下去；在小实验室里，自由探索。丁香通试用中心为助力科研，特推出申请试用装，送丁当的活动。活动时间：2013.10.9-10.30活动形式：跟帖附上申请的试用装，每申请一件，送2个丁当。格式：我申请：动物组织总RNA提取试剂盒重点推荐：5款PCR、RNA提取试剂盒产品特点简介：1. 动物组织总RNA提取试剂盒：去除DNA污染；无需担心RNA ...

刚开始做慢病毒。在此慢慢归纳总结。慢病毒载体（Lentiviral vector, LVs）是在HIV-1病毒基础上改造而成的病毒载体系统，它能高效的将目的基因（或RNAi）导入动物和人的原代细胞或细胞系。慢病毒载体基因组是正链RNA，其基因组进入细胞后，在细胞浆中被其自身携带的反转录酶反转为DNA，形成DNA整合前复合体，进入细胞核后，DNA整合到细胞基因组中。整合后的DNA转录mRNA，回到细胞浆中，表达目的蛋白；或产 ...

《生物实验室安全故事手记》隆重登场！国内第一本依靠网络力量、由专业人士编写而成的实验室安全类书籍!主编 孟博 ID：Biowind实验室通则 副主编 田智 ID：tianx775分子实验室 副主编 向征 ID：jnuxz细胞实验室 副主编　 吴瑨 ID：b01191111微生物实验室 副主编 裴得胜 ID：kaige88动物实验室 副主编　 孙世顷 ID：shiqingsun出版单位：科学出版社原　价：￥ 36.00 元丁香园优惠价：￥ 28.80 元购买方式：丁香淘宝在线购买银行汇款：建设银行　1540 2099 ...

核糖核酸酶保护实验(Ribonuclease protection assay，RPA)是近十年发展起来的一种全新的mRNA定量分析方法。其基本原理是将标记的特异RNA探针(32P或生物素)与待测的RNA样品液相杂交，标记的特异RNA探针按碱基互补的原则与目的基因特异性结合，形成双链RNA；未结合的单链RNA经RNA酶A或RNA酶T1消化形成寡核糖核酸，而待测目的基因与特异RNA探针结合后形成双链RNA，免受RNA ...

大家都对单核苷酸多态性（SNP）不陌生了，学理学生物的、学医学的、学农学的对此都算是有了一定的了解，这玩意在我的概念中就是检测碱基的变化状况而已（似乎太白话了），虽然只是检测，但是检测方法却是多种多样，如何选择合适的检测方法对整个实验来说确实是个重要的问题，选择无外乎三样：时间、钱、文章档次。目前来说，SNP检测应用比较多而且真正实用的，用来发文章的有测序、限制性片段长度多态性（RFLP）检测、质谱检测、Taqman检测 ...

进行中的核转录分析nuclear run on transcription assay在细胞和提取物中加入放射性核素标记的核苷三磷酸，使其掺入到正在转录的mRNA分子中。通过核酸分子杂交的方法，即可以同时鉴定出多种不同基因是否转录以及其转录的量。该方法作为一种比较可靠的测定转录活性的方法，排除了northern blot等方法中mRNA的半衰期对实验结果的影响，可同时分析多种基因的转录活性。The idea of this assay is to i ...

最近做DNA shuffling，本来去年做过，但这次做不知怎么搞的，片段用DNase I怎么也切不好，跑胶后什么也没有，请问哪位做过，交流一下protocol,我的片段1.2kb,想得到100bp的,谢谢建议讨论从如下方面展开：1、技术名字、基本原理2、具体实现方法/手段3、应用4、优缺点5、相关技术发展概况6、在PNAS、science、nature、JBC等杂志上的经典应用文献翻译与点评7、其他本版前期的明星技术：1. 【交流】 ...

最近总是看到一些战友发帖求助有关酶切方面的问题，因为它影响到了后续的重组质粒构建，而且似乎都无从说起。但我认为考虑全面了还是有章可循的。1 ：目的载体的控制无论它是空载体还是已经插入片段的载体，都必须保证：A ：质粒最好新鲜抽提，且抽提后电泳显示正常。质粒的长期保存形式建议以平板上的单克隆置于四度或者冻干状态于负20度，菌种尽可能以高浓度甘油状态置于负80度。B ：质粒的多克隆位点经测序后显示正确，尤其是表达载体，需要用 ...

分光光度计分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA。核酸在波长 260 nm处有最高吸收峰。吸收紫外光的性质是嘌呤环和嘧啶环的共轭双键系统所具有的，所以嘌呤和嘧啶以及一切含有它们的物质，不论是核苷、核苷酸或核酸都有吸收紫外光的特性。但紫外法不能区分DNA和RNA，只能用来 ...

慢病毒——基因转移的潜在新载体　　用于基因治疗的载体系统可分为病毒性载体和非病毒性载体两类。目前常用的病毒载体包括逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体、疱疹病毒载体、痘苗病毒载体等,但是这些载体均存在不足之处,严重影响了基因治疗的有效性及安全性。在基因治疗中广泛应用的逆转录病毒载体存在的主要问题,是无法高效转导非分裂期细胞,而腺病毒载体虽然能转导非分裂期细胞,但在体内不能实现目的基因稳定的长期表达,且反复应用容 ...

真假GelRed风波目前，美国Biotium中国区唯一总代理商接到一些客户投诉，声称从某些经销商那里买到了假货GelRed产品，实验效果很不理想。由此，总代理公司受美国总公司方面委托，一方面致电新老客户当心假货，建议从正规渠道购买原装产品；另一方面安排实验部门开展核酸凝胶电泳实验，帮助广大客户鉴别真假GelRed。目前市场上几种代表性的核酸染料：GelRed是一款集高灵敏度、低毒性和光稳定性于一体的核酸凝胶染 ...

有句话说得好：试用，是一种生活态度！能让我们的生活换一种方式，无所谓成功与否，尝试着申请都会让工作和生活充满快乐和期待。试了，才会发现快乐，未知，才有更广的世界。丁香通试用中心聚集了各类业界有名的商家所提供的试用机会以及业内人员最真实客观的试用报告，好东西就该亮出来，试用中心9月免费试用装精品来袭，小伙伴们接招吧！新活动：凡申请2件试用装送1个丁当，申请3件送2个丁当，赶快行动吧！参与方式：申请后将对应试用装申请记 ...

自己做ChIP有一段时间了，将一些经验教训写上来，给自己作个总结，备个份。 重要的地方，可以决定结果的好坏 1、cross-link：甲醛浓度、胶联时间一般都使用1%formaldehyde，但也有人用浓度偏高的，比如：add 10 ml of Fresh PBS and add 270 ul of 37% formaldehyde, swirl gently to mix, and place at room temp 10 min.胶联时间很是关键：The duration of formaldehyde treatment is a ...

我索要质粒前也是参考了很多丁香园的帖子，所以有些语句可能和以往的范本雷同，请大家见谅哦2007年3月20日主题：explore the possibility of getting *** from your laboratory信件：Dear Dr. **,I am a post graduate student in ***Institute, Chinese Academy of Sciences. And one of my projects focuses on ***. It seemed that the mechanism you ind ...

LIPOFECTAMINE 2000转染试剂转染步骤此实验步骤设计用来进行24孔板贴壁细胞的瞬时或稳定转染，其为设计用来在生长培养基中直接加入复合物。1. 转染前一天，胰酶消化细胞并计数，细胞铺板，使其在转染日密度为90%。细胞铺板在0.5ml含血清，不含抗生素的正常生长的培养基中（参见表6了解建议的细胞密度）。2. 对于每孔细胞，使用50μl无血清培养基（如OPTI-MEMⅠ培养基）稀释0.8μg-1.0μg DNA。多孔操作可以批 ...

本期明星技术：allele-specific expression analysis/assay人类基因组计划的结构基因组测序完成后，留下了海量的序列信息。然而，这些序列有何功能，多数尚不得而知。在序列功能研究中，除了基因及其亚结构功能探讨外，还有一个重要的内容，那就是同一序列的多型性也可能具有不同的功能（或具有不同的功能强度）。特别是近来的研究已经肯定性地证明，很多位点同一位置因碱基不同而所致的多态或突变（如SNPs）， ...

In vitro site-specific mutagenesisAn in vitro technique in which an alteration is made at a specific site in a DNA molecule, which is then reintroduced into a cell.Various techniques are used; for the cell biologist,a very powerful approach to determining which parts of a protein or nucleotide s ...

这是根据我写的一个PPT摘录的，希望能有朋友讨论这方面的问题。并拓宽这个领域，讨论epigenetics更广泛的问题。毕竟epigenetics是现在动物功能基因组研究的主流和一个重要方向。1. 印迹基因的概念及重要意义概念:基因组印迹是特指来源于亲本的等位基因进行不对称后成修饰后而导致的单等位基因表达的现象。这种在生物进化中形成的、有规律而又受控的基因失活是机体中基因表达调节的一种重要方式。2. 研究印迹基因的重 ...