DNA实验技术

John Mundy Institute of Molecular BiologyCopenhagenDenmark http://www.arabidopsis.org/info/Protocols_Mundy2.jsp#Footprint 1)probe: same as used for gelshift)isolated by isotacelectrophoresis w/out E ...

鉴定转基因植物的第一步就是要确定被转基因已经稳定的整合到了染色体上。第二步任务就是评估有多少个转基因拷贝，以及每个转基因的表达水平如何。一般经过上游表达载体的设计构建以及下游转化体系的建立、转化品系的筛选鉴定等一系列步骤后，即获得 T 0 代转基因植物。在转化过程中，外源 DNA 随机插入植物内，插入的拷贝数和位点都不固定。插入外源基因的拷贝数低（1或2个）能较好的表达，插入的拷贝数多则会导致表达 ...

带正电的DEAE-葡聚糖与核酸带负电的磷酸骨架相互作用形成的复合物被细胞内吞 瞬时转染 相对简便、重复比磷酸钙好但对细胞有一定的毒副作用转染时需除血清且一般只用于BSC-1CV-1COS细胞系 Sigma-Aldrich(DEAE-Dextran Transfection Kit)磷酸钙法 磷酸钙DNA 复合物吸附细胞膜被细胞内吞 稳定转染染瞬转染 不适用于原代细胞（所需的DNA 浓度较高）操作简 ...

Hi I looked for CpG islands within the promoter of my gene.MethPrimer and CpG plot analysis revealed that in this genes promoter region there were two big CpG islands at locations 280-603 and 693-859. ...

目的 ： 采用碱变性法，学习小规模制备质粒DNA的技术 原理 ： 碱变性抽提质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH值高达12.6的碱性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离，当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH值至中性时，变性的质粒DNA又恢复原来的构型，保 ...

重组DNA技术涉及到组合不同来源的遗传信息，从而创造自然界以前可能从未存在过的遗传修饰生物体（genetically modified organisms，GMOs）。最初，在分子生物学家中有人担心这些生物体可能具有不可预测的不良性状，一旦从实验室逸出将带来生物学危害。这种担心在1975年美国加利福尼亚州阿西洛马市召开的科学会议上成为焦点。在那次会议上讨论了重组DNA技术的安全问题并提出了第一个重 ...

Deproteination using phenol/chloroform (Maniatis et al.1982) 'Phenol' as used is Analar grade.Phenol should be melted at 65℃ 8-hydroxyquinoline added to a final concentration of 0.1%and equilibrated t ...

Isolation of Mouse genomic DNA 1.Kill mouse by cervical luxation and dissect liver.Add to a 50ml tube and place on liquid nitrogen.Grind to a powder under liquid nitrogen using a mortar and pestle. 2. ...

BAC提取前准备（前两天 ） 配制含25 mg/l Kan的LB培养基选择平板，在超净工作台上用接种环从购买的BAC划线接种至选择平板，于37℃培养箱培养过夜，供选择单。 BAC提取前准备（前一天） 1、在超净工作台上，用50 µg/ml Kan和液体LB培养基配制成25 mg/l Kan培养基，每个Falcon试管分装10 ml。也可先分装10 ml无抗生素的液体LB培养基后，然后每 ...

本法用含EDTA的溶液洗涤细胞，SDS（十二烷基硫酸钠）破碎、裂解细胞，消化蛋白质，使核蛋白解聚并使细胞内的DNA酶失活，用酚、氯仿变性蛋白质并去除杂质，最后用乙醇沉淀得到纯化的DNA。 1.裂解缓冲液 2.苯酚-氯仿溶液 3.氯仿-异戊醇溶液 4.冰无水乙醇及70%乙醇 5.TE缓冲液 6.5mol/L NaCl 1.处死小白鼠一只，取新鲜肝脏，用生理盐水清洗去血水。 2. ...

1.Excise band of interest from a TAE gel; estimate volume by weighing the gel slice. 2.Dissolve the gel slice in 3 volumes of NaI (from Geneclean kit)at 55E C for 5 min or until the gel dissolves. 3.A ...

Important : Extract the DNA within one week of receiving samples.Samples that have been processed should be frozen to prevent degradation.Freeze samples between use each day. 1.Add 600 ml of 50 mM NaO ...

Sanger双脱氧链终止法 Maxam－Gilbert DNA化学降解法 测序策略 目前应用的两种快速序列测定技术是Sanger等（1977）提出的酶法及Maxam和Gilbert(1977)提出的化学降解法。虽然其原理大相径庭，但这两种方法都是同样生成互相独立的若干组带放射性标记的寡核苷酸，每组寡核苷酸都有固定的起点，但却随机终止于特定的一种或者多种残基上。由于DNA上的每一个碱基出现在可变 ...

Note All centrifugation speeds are given in units of g.Please refer to Table 1 for information on vonverting g -force to rpm.If centrifuges/rotors for the required g -forces are not availableuse the m ...

目的： 1.从人或动物血液中抽提DNA 。 2.从体液，唾液，尿液中抽提DNA 。 3.从人体组织，切片和各种临床样品中抽提DNA 。 4.抽提出的DNA 可以用于PCR及相关诊断。 原理： 临床常常需要从各种生物组织或细胞中抽提基因组DNA ，用于病症的辅助性分析和诊断。样品根据试剂盒（SK1341试剂盒，上海生工）提供的方法进行处理，然后在特定的DCL Buffer中用Protenase K ...

Section of Cancer GenomicsGenetics BranchNCI National Institutes of Health Reagents Chloroform Mallinckrodtcat.4440 EDTA0.5 M Ethanol100% Ethanol70% Isoamyl Alcohol Sigmacat.I-3643 Phenol Gibco BRLCat ...

一．农杆菌感受态细胞的制备 （同大肠杆菌质粒DNA的提取），然后将其转化大肠杆菌，再提取大肠杆菌的质粒DNA进行酶切鉴定。 取-70℃保存的EHA105于含有50μg/ml链霉素平板划线，28℃培养2天。挑单菌落接种于5ml YM（0.5g/L KH2 PO4 10 g/L Mannitol2 g/L L-Glutamine0.2 g/L NaCL0.2 g/L MgSO4 0.3 g/L ...

现代分子生物学研究发现，中药材(不含矿物药)所依赖的生物资源――“物种”的多样性是由于其基因多态性的结果，而基因多态性可在分子水平上检测，它比在形态、组织和化学水平上检测更能代表其变异类型的遗传标记。传统的分子标记主要有血清学特征、蛋白质谱 、同工酶谱，近10年来则有迅速发展起来的DNA 分子标记，现介绍如下。 1 　传统的分子标记 1.1　抗血清　中药有许多具有抗原决定 ...

Pyrosequencing是对短到中等长度的DNA序列样品进行高通量的、精确和重复性好的分析的技术。 第一步——测序引物和PCR扩增的、单链的DNA模板杂交，与酶—DNA聚合酶（DNA polymerase）、ATP硫酸化酶（ATP sulfurylase）、荧光素酶（luciferase）、三磷酸腺苷双磷酸酶（apyrase）—和底物&mdash ...

摘要： DNA 甲基化是表观遗传学(Epigenetics)的重要组成部分，在维持正常细胞功能、遗传印记、胚胎发育以及人类肿瘤发生中起着重要作用，是目前新的研究热点之一。随着对甲基化研究的不断深入，各种各样甲基化检测方法被开发出来以满足不同类型研究的要求。这些方法概括起来可分为三类：整体水平的甲基化检测、基因特异位点甲基化的检测和新甲基化位点的寻找。本篇将主要介绍目前存在的大部分DNA 甲基化研究 ...