DNA实验技术

基本概念1）基因工程（genetic engineering）、基因克隆、DNA重组、DNA克隆、分子克隆。2）克隆（clone）：无性繁殖——应用酶学的方法，在体外将目的基因与载体DNA结合成具有自我复制能力的DNA分子（重组子），再通过转化或转染宿主细胞、筛选出含有目的基因转化子，进行扩增、提取获得大量同一DNA，或其表达产物。基因克隆的基本步骤1）连接外源基因和克隆载体，构建重组DNA分子； ...

加、减、换一个载体的MCS的位点（给一个表达载体加、减、换小表达标签，如His6， His10，strep II等，和MCS改造是一样的），其实技术不是问题，问题在于位点的选择，因为载体设计时应该设计者也考虑过mcs的问题，应该给使用者越多的选择越好，但为什么有的载体只给有限的几个位点呢，一可能是这个载体其他部位本身含有的限制性切点比较多，因而MCS位置的选择比较少，二就是设计者是自用的载体，没有 ...

DAPI 即4'6-二脒基-2-苯基吲哚(4'6-diamidino-2-phenylindole)，分子式为C16H15N5·2C3H6O3 ，分子量457.48。DAPI是一种能够与DNA强力结合的荧光染料。它结合到双链DNA小沟的AT碱基对处，一个DAPI分子可以占据三个碱基对的位置。结合到双链DNA上DAPI分子的荧光强度提高大约20倍，常用与荧光显微镜观测，根据荧光的强度可以确定DNA的 ...

核酸样品经过直接点样或转移到硝酸纤维膜上，固定后，可以进行杂交反应。在杂交溶液中，硝酸纤维膜上变性的核酸样品和变性后的探针在一定的条件下形成双链杂交核酸分子。然后进行酶标显色。试剂及操作方法见本节　三。五、真核细胞基因组的制备从不同组织细胞或血细胞中提取是进行基因诊断的先决条件。制备的原则是既要将蛋白质、脂类、糖类等物质分离干净，又要保持分子的完整。蛋白酶K的应用使这两个原则得到了保证。在提取的反 ...

（一）概述基因诊断是以核酸分子杂交技术为基础，在核酸水平检测人类遗传性疾病的基因缺陷和一些传染病病原体的方法。其基本过程是：制备探针，标记探针，检测样本。开展这项工作的关键是要得到高灵敏度、高特异性的探针。以往人们是用放射性同位素来标记探针。近年来，非同位素标记方法发展很快，已有取代同位素标记法的趋势。地高辛配基随机标记探针法，是较为成功的一种非同位素标记方法。其原理是：用化学方法把类固醇类半抗原 ...

凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA）是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白，目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。 其基本原理是蛋白质可以与末端标记的核酸探针结合，电泳时这种复合物比无蛋白结合的探针在凝胶中泳动的速度慢，即表现为相对滞后（如下图所示）。该方法可用于检测DNA结合蛋白、RNA结合蛋白 ...

Pour Acrylamide Gel:1. Assemble Plates spacers and clamps. Seal with 1% agarose to prevent leaks.2. Pour 5% acrylamide GelPlate size Large MediumH2O ...

按照常见的protocol大多使用的是non-denaturing PAGE。其实最早的时候，主要有两种胶，一种是PAGE一种是agarose。但是开始的时候agarose主要是用以比较大的complex，例如TFIID-DNA等。文献可见：（1）ZerbyD. and LiebermanP.M. (1997) Functional Analysis of TFIID-Activator Inte ...

1. Introduction2. Materials3. Methods4. NotesPreparation of Probes and CompetitorsOptimization of Reaction ParametersControls for SpecificityElectrophoretic ConditionsExtended ApplicationsReferences从原 ...

凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA-electrophoretic mobility shift assay）是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白，目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。 通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温，在非变性的聚丙烯凝胶电泳上，分离 ...

非放射性凝胶迁移试剂盒（EMSA）操作手册 ...

原理：此技术建立于PCR基础之上，使用一系列具有10个左右碱基的单链随机引物，对基因组的DNA全部进行PCR扩增，以检测多态性。由于整个基因组存在众多反向重复序列，因此须对每一随机引物单独进行PCR。单一引物与反向重复序列结合。使重复序列之间的区域得以扩增。引物结合位点DNA序列的改变以及两扩增位点之间DNA碱基的缺失、插入或置换均可导致扩增片段数目和长度的差异，经聚丙烯酰胺或琼脂糖凝胶电泳分离后 ...

H. Simmler and H. SingpielAcconovis GmbHLindenhofstr. 42-4468163 Mannheim GermanyeMail: simmler@acconovis.comR. M¨annerUniversit¨at MannheimB6 23-2968131 Mannheim Germanymaenner@ti.uni-mannheim.deAbst ...

This protocol describes a method for isolating DNA from plant tissue.Procedure1. Preheat the CTAB Isolation Buffer at 60°C.2. Grind 2 g of fresh leaf tissue to a powder in Liquid Nitrogen in a chilled ...

DNA提取需在II级生物安全柜内完成1.用打孔器将6mm直径大小的DBS打入1.5ml的离心管中，用烧灼和酒精搽拭的方法消毒打孔器头部。2.每个离心管中加入1ml去离子水，涡旋10秒，在管壁外侧做离心方向标记；3.将离心管置于摇床上，转速500-600转/分，室温，摇动15分钟；4.室温下，离心管12500×g，离心3分钟；5.小心从离心管中吸去上清约950μl去离子水，留50&m ...

1.加入solution.III，经10分钟离心后细菌沉淀怎么不结实，有的漂浮在液面，有的贴在离心管壁上，一摇晃即破碎脱落下来？细菌的用量太少，导致产生的沉淀主要是盐分的沉淀，因为缺少变性的细菌蛋白和细菌基因组DNA的缠绕，沉淀就显得不结实。解决方法：将细菌的用量增加。2.加入soln.III，经10分钟离心后细菌沉淀怎么不结实，呈大块的水泡状，上清较少？（1）使用了过多的细菌，导致菌体未被有 ...

　　近10年来，现代分子生物学技术越来越广泛地被用于人类疾病研究的诸领域，为了解病理状态下基因组DNA的变化积累了新资料。目前认为，人类基因组并非人们想像的那样稳定，诸如基因重排、扩增、缺失，突瘘和DNA甲基化类型改变等时有发生，这些改变对于基因表过和调控，以及疾病过程的发展与转归等方面均具有重要意义。 　　医院病理科档案中积存的大量石蜡包埋组织，是一个可靠的分子生物学研究的材料来源。在石蜡 ...

幼苗萌发 本研究采用国际麦类染色体制图动议(ITMI)的小麦群体的亲本Opata、W-7984，种子在8格的长方形组培盘中进行，盘中放发芽纸(2.5×3cm)，每格10粒种子，加水，见图所示(略)。将培养盘置于25℃的黑暗条件下24小时，然后在温度为27℃、日长为16小时的条件让其发芽，时间为72小时。一套材料立即提取DNA，另一套材料放在具96格的培养盘中，贮藏在 ...

BioGene-ExpuzeTMDNA 10分钟快速提取试剂盒中文说明书从全血样本提取DNA的操作规程1、在离心管中加入900 µl的溶液 1及250-300 µl的全血，振荡30秒。2、离心（9000 rpm，1分钟），倒掉上清液。3、先至少振荡30秒，以打破Pellet。4、加入400 µl 溶液2，振荡20秒使Pellet完全溶解（在光线下溶液应清亮透明） ...

3 植物总DNA 的提取 1976 年，Millgan 用Blin 和Stafford 描述的方法分离了植物DNA，然而这些DNA 是不能用于克隆的。在发明了去除植物DNA 上污染物的方法之后，人们可用分离动物组织DNA 的方法分离植物DNA。去除植物带电高分子污染物的方法有核分离（Bickle 等1977）。CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）分离（Murray，Thompson 1980）和 ...