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        提取干血斑中的DNA样本

        互联网

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        DNA提取需在II级生物安全柜内完成

        1.用打孔器将6mm直径大小的DBS打入1.5ml的离心管中,用烧灼和酒精搽拭的方法消毒打孔器头部。

        2.每个离心管中加入1ml去离子水,涡旋10秒,在管壁外侧做离心方向标记;

        3.将离心管置于摇床上,转速500-600转/分,室温,摇动15分钟;

        4.室温下,离心管12500×g,离心3分钟;

        5.小心从离心管中吸去上清约950μl去离子水,留50μl于管中;

        6.重复2-5步;

        7.每管中加入新鲜配置的10% Chelex100 Resin 150μl(0.1克Resin / 1ml去离子水),涡旋混匀10秒;

        8.室温下,离心管12500×g,离心3分钟;

        9.水浴箱中56℃,温育2小时;

        10.取出离心管轻轻振荡;

        11.放入100℃开水中煮沸8分钟;

        12. 室温下,离心管12500×g,离心3分钟;

        13.立即小心吸取100-120μl上清(应避免吸到Chelex100树脂,其对PCR有抑制作用)于干净的管中;

        14.放于-20℃保存。

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