DNA实验技术

wanglingyun1981 :)各位大虾帮帮忙，用绿色荧光蛋白以及neo构建载体，转染牛成纤维细胞后，开始是绿色荧光还很亮，可是G418筛选一段时间后，会荧光会越来越弱，到最后筛出单克隆，也几乎没有有荧光的单克隆了。原因是什么？有好的解决办法吗？谢谢各位 ！！绿色荧光蛋白用的cmv启动子。slytjiaofei 1.开始时的荧光很强，这个很好解释，因为开始时未进行G418筛选，所以发绿色荧光的细胞有两部分，一是未稳定整合的 ...

gn0301 某一基因由DNA转录为mRNA，再由mRNA翻译为蛋白质，最后蛋白质经修饰变成有功能的蛋白，有诸多的调控因素参与其中。我曾听说：蛋白表达的增加，需要基因启动子的活化，或者在转录后水平存在调控，增加mRNA的翻译，总之，可能存在多个水平参与蛋白的合成。想请学基础的战友帮个忙，我急需这方面的权威文献，哪位战友可以奉献在下一篇。非常感谢！邮箱：bai_qx@126.com细胞因子 已发，不知道能不能解决你的疑问。gn ...

伽利略 弄不太清，求教freecell 我个人认为，无论原核还是真核生物，启动子只是基因表达差异的因素之一。xiangchou812 不知楼主所说的启动子的活性是什么意思？启动子只是一段DNA序列，不是通常所说的蛋白因子等，其也有活性吗？我也是刚入门，不知启动子能否用活性一词来形容，大家可以讨论一下。向大家学习。伽利略 谢谢2楼，我同意你的看法，但是所看文献对结果的分析，是默认启动子活性没变，基因表达就没变，3楼 ，promoter a ...

andyg272727 请哪位大侠帮我查查SHGC-149152这个基因片段有没有外显子和内含子？多谢了！freecell http://howdy.jst.go.jp/HOWDYCL//HOWDY.pl?Cls=GenBank&Key=UKEY&Val=al590128andyg272727 谢谢你的关注，但是你给的网址里边没有关于外显子，内含子的信息啊？请指教！本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实 ...

wgfking2003 在生化和分子生物学中，都有提到在真核生物中内含子是要被剪切掉的，所以不能够被翻译出来。但是还存在着一种翻译内含子，就是在指mRNA 中存在与内含子对应的核苷酸顺序， 但是在翻译过程中这些顺序披“ 跳跃” 过去， 因此产生的多肽链不含有与内含子对应的氨基酸顺序。并且hnRNA，就是mRNA的前体（没有被剪切掉内含子）在体外也是可以被翻译出来的。所以我想问hnRNA翻译出来的序列是否包含内含子的那部分序列，如果是的 ...

xiaomage124 请问丁香园里的战友们，谁做过点突变？TOP10F'是不是甲基化菌株？恳请指教，多谢啦！:)有请好人帮我分析下TOP10F'菌株是否有甲基化功能，因为我要做点突变，如果这个菌株具有甲基化外源质粒DNA的功能就可以了，以下是此菌株对应的基因型，多谢啦！:)F'{lac Iq Tn10(TetR)} mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15 △lacⅩ74 recA1 araΔ139Δ(ara-leu)7697 ga ...

eleven1113 我还在看关于高IgE综合征的文章，这篇文章Yoshiyuki Minegishi et al.Dominant-negative mutations in the DNA-binding domain of STAT3 cause hyper-IgE syndrome nature 2007 448: 1058-1063怎么叫Dominant-negative mutations？请教大家哈，谢谢了zhujoker dominant negative mutant中文名是 ...

huangwenshu wangjinxia198 http://genome.ucsc.edu/中Gene Sorterhttp://www.ensembl.org/index.htmlhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/中 search选基因for后填基因名查小鼠的基因可以进入http://www.informatics.jax.org/以上四个相互都有其他数据库的链接renfenglei 同意！huangwenshu 谢谢 ...

eleven1113 请问大家！http：//www.gene. ucl.ac.uk/nomenclature这是基因管理委员会的网址？但是打不开啊！比如一个基因叫做R335W它为什么是这样写啊？数字和字母分别代表什么啊？freecell 基因命名规则：White JA. Genomics, 1997, 45：468--4711 一般规则(1) 基因符号应为大写的拉丁字母或大写的拉丁字母和阿拉伯数字的组合。基因符号为了有使用的价值应尽可能地简洁, 而且不要试图 ...

babyzxl 如题，怎样寻找一个基因的转录调控因子？拜托啦！希望有详细的说明，我照做就可以啊。chenxsng 推荐你看看这篇文章 Cell, 136, 175-186.附件大小有限制，传不上去....Purification of Proteins Associated with Specific Genomic LociCell, Volume 136, Issue 1, 9 January 2009, Pages 175-186Jérôme Déjardin, Robert E. Kingstonfreec ...

et83214 我做水稻基因后期功能验证的时候，需要构建基因沉默载体，然后转基因至正常植株中，看有没有目标表型现在我照着用得比较多的，自己重组改造了pNW55得到artificial miRNA，然后装到过表达的载体中，然后转基因。不过因为实验室还没有这方面的成功先例，怕不保险，所以也想做一下siRNA，网上有很多在线设计，通过Blast验证以后，基本确定了几个RNAi的目标。想问一下这方面的专家1. artificial m ...

xiongran 急求ISRE报告基因质粒，干扰素信号通路的报告基因，愿拿其它质粒作为交换！shuyangsy1986 大哥，现在你弄到ISRE的报告基因的质粒没有啊，还有β-干扰素的啊，我也需要啊，先谢了啊xiongran 几百年前的事情了，没有求到，我都不做这个了本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

summityoung 那位学长有ISRE质粒，谢谢。我有多种质粒可以交换zfv2007 Do you have any lentivirus plasmid?zhujoker 我有，就是具有IRES启动子的质粒吗？本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

wenzhu24 本人正准备进行课题设计，找到了一个比较感兴趣的抑癌基因，但是不清楚它在我所研究肿瘤中的表达情况。后来看到了我们实验室做的一个关于肿瘤和癌旁组织的基因芯片（需要注明的是由于经费问题只做了一组癌和癌旁组织），发现这个基因在癌和癌旁组织的改变不明显。想咨询各位：仅仅一组癌和癌旁组织的基因芯片是否能够做参考？这个基因在癌中的表达就真得没有变化呢？ebio66 一对样本太少，说明不了问题。建议再做上几个样本的 ...

chichao0000 小弟是个出做实验的新兵，问一个比较初级的问题：计划从活体上去组织，然后检测基因多态性，全部检测，不是针对某个基因，请问各位战友，怎么做呀，是用DNA测序吗？是不是得很贵呀？望各位战友解答！感谢！西门飘脸 基因多态性检测没必要用测序的啊不是很明白你说的是什么意思多态性检测，还全部检测，好矛盾啊suny0354 你是要寻找新突变，还是检测已知的突变，如果是发现新突变可以测序，如果是已知的，也不一定用测序cp ...

river33617 大家好，学生我最近做悬浮细胞的转染。转染入对照质粒的细胞生长正常，但表达目的基因的细胞渐渐成团生长。初步考虑是该目的基因激活了黏附因子的表达，请问高手们这些黏附因子有哪些啊？ 如果能提供一两篇综述就更感激了。谢谢。river33617 顶一个，继续求助，谢谢了。jing3324 做个芯片去GO分析，这样还能有很多意外收获。lwjssry 这个课题非常有意思啊river33617 lwjssry wrote:这个课题非 ...

sjgao 我做信号通路的课题，想用基因芯片来做。请问是否要和公司商谈在设计基因芯片时要把哪些信号通路的分子放在芯片里？还是一张芯片可以包含所有的分子？请高手指点！不甚感激！ebio66 除非做的芯片的量很大，可以考虑定制。否则，建议直接做全基因组芯片。现在有一款全基因组芯片价格很便宜，做起来省时间也省钱。除了信号方面的信息外，其他信息可以提供一些支持或补充。daikey_xie supperarray的功能分类基因芯片针 ...

minminlhm 不知道哪位大侠有比较成熟的基因串联的方法，或者相关的比较牛的实验室的参考文献。希望不吝赐教。minminlhm dingbentz 我试过利用T载体的制造方法把基因串联起来...具体就是先把载体改造一下,插入一个EcoRV位点,切之然后加T制成T载体,然后把基因P出来(引物设计的时候加上一个EcoRV位点),按T克隆的做法把基因克隆进去(在载体上另设一对引物用于克隆筛选).因为引物上带了EcoRV位点,又 ...

lwjssry 【求助】积分换质粒，急求pIRES2-EGFP，pBudCE4.1求pIRES2-EGFP，pBudCE4.1，积分交换，详见http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=133&id=11398213&sty=1&tpg=1&age=0kaige88 支持把，获得pIRES2-EGFP可要通知我哦！也想用到此质粒，呵呵。。。lwjssry 继续求助pBudCE4.1，还请大家多多帮忙啊，谢谢！kaige ...

re-loxP是一种位点特异的基因重组技术，被广泛应用于特异位点的基因敲除、基因插入、基因翻转和基因易位，在真核生物和原核生物中均有广泛应用。Cre-loxP的基本原理Cre蛋白是一种重组酶，是causes recombination的缩写，于1981年从P1噬菌体中被发现，属于λInt酶超基因家族。Cre重组酶基因编码区序列全长1029bp（EMBL数据库登录号为X03453），编码38kDa蛋白质，Cre重组酶 ...