DNA实验技术

Q：利用凝胶回收试剂盒DNA回收效率较低或者未回收到目的片段？A：可能有以下几个原因： 1. 胶块未完全溶解，可适当延长水浴时间，并增加上下颠倒次数辅助溶解； 2. 胶块体积太大，应先将其切为小块，分多次回收； 3. 电泳缓冲液pH太高，硅基质膜在高盐低pH结合DNA，如pH太高，应作适当调整；4. 漂洗液中未加入无水乙醇。Q：能否改用去离子水洗脱？A：可以。但是实验室所用纯水一般 ...

问题可能原因解决方案回收率低膜结合液（MB）使用量不当按每1 mg凝胶或每1 µl DNA溶液加入1 µl膜结合液的比例（1:1）加入膜结合液溶胶不完全尽量将胶切成小块，加入膜结合溶液后于55～65℃加热助溶，确保溶胶彻底离心转速不够，溶液中的DNA没有与硅胶膜充分结合使用离心力≥12000x g的离心机，如达不到该转速，可通过适当延长离心时间确保胶溶液完全通过硅胶膜膜漂洗液（MW）未添加乙醇第一 ...

　　蛋白酶k是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶，用于生物样品中蛋白质的一般降解。从林伯氏白色念球菌（tritirachium album limber）中纯化得到。该酶有两个ca2+结合位点，它们离酶的活性中心有一定距离，与催化机理并无直接关系。然而，如果从该酶中除去ca2+，由于出现远程的结构变化，催化活性将丧失80%左右，但其剩余活性通常已足以降解在一般情况下污染酸制品的蛋白质。所以，蛋白酶k消 ...

细胞内的核酸包括DNA与RNA两种分子，均与蛋白质结合成核蛋白(nucleoprotein)。DNA与蛋白质结合成脱氧核糖核蛋白(deoxyribonucleoprotein，DNP)，RNA与蛋白质结合成核糖核蛋白(ribonucleoprotein，RNP)。其中真核生物的DNA又有染色体DNA与细胞器DNA之分。前者位于细胞核内，约占95%，为双链线性分子；后者存在于线粒体或叶绿体等细胞器内 ...

This protocol was designed to generate directionally end-labeled probes for DNaseI footprinting but it can be used for any application that requires end-labeled DNA probes.Solutions10 mM dNTP StocksTh ...

1. Separate DNA fragments in an agarose gel cast with 0.5 mg/mL Ethidium bromide. Locate bands with a hand-held long-wave UV lamp.2. Slice the gel with a razor blade above and below the bands of inter ...

This procedure isolates DNA from agarose gels by filtration through a filter-paper column. The column is made in a 500 µL tube from a slurry of filter paper in TE buffer.MaterialsWhatman 3MM filter pa ...

This procedure allows the concentration of DNA samples from dilute solution and the removal of unwanted salts from DNA samples.Materials3M Sodium Acetate buffer pH 5.2 (store at 4 °C) Cold 100% Ethano ...

（一）DNA的酶切与连接 　　（1）酶切反应　　同质粒DNA的鉴定，只不过是质粒DNA换为载体DNA。若大量酶切，则成比例增加。　　（2）加2倍体积的预冷无水乙醇和1/10体积的3mol/l NaAc混匀，-20℃2h以上。　　（3）15000rpm离心15min，弃上清。　　（4）加入75%乙醇洗涤2次，离心弃上清，真空抽干。　　（5）加入适量1×TE溶解。如此可得线性化载体DNA。　　（6）测 ...

Labeling oligonucleotides with 32P ATPSteve HahnLast modified 8/13/01Wear gloves throughout and work in radiation area. Monitor area before and after use.Mix the following in an eppendorf tube:1. 0.5 ...

DNA以核蛋白形式存在于细胞核中，制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离，又要保持DNA分子的完整。蛋白酶K及链霉蛋白酶E的应用使这两个原则得到了保证。 蛋白酶K或链霉蛋白酶E均为广谱蛋白酶，其重要特性是能在SDS和EDTA存在下保持很高的活性。在匀浆后提取DNA的反应体系中，SDS可破坏细咆膜、核膜，并使组织蛋白与 DNA分子分离，EDTA抑制细胞中DNase活性， ...

细胞内的核酸多以核蛋白的形式存在，其中脱氧核糖核蛋白主要存在于细胞核中，核糖核蛋白主要存在于细胞质中。这两类核蛋白在0.14mol／L氯化钠溶液中的溶解度相差很大，核糖核蛋白在此溶液中具有很高的溶解度，脱氧核糖核蛋白的溶解度却相当低。制成肝匀浆后，用0.14mol／L氯化钠溶液抽提，可将两种核蛋白分离。分离过程中加入少量柠檬酸钠，可抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的水解作用。 SDS(十二烷基硫酸钠) ...

1.Vectorpedia： 输入质粒骨架，直接查询，非常方便;http://www.addgene.org/pgvec1?f=v&cmd=listvecinfo2. google检索式子：质粒名 ＋ map 质粒名 ＋sequence ＋filetype:txt or filetype:pdf或者：进入google，点击"图片搜索"，直接查找图谱.3.google scholar: http: ...

DNA聚合酶催化的DNA链延伸是在3’-OH末端上进行的。由于2’，3’-双脱氧三磷酸核苷酸(ddNTP)的3’-位脱氧而失去游离-OH，当它参入到DNA链后，3’-OH末端消失，使DNA链的延伸终止。 本实验根据此原理，将待测DNA片段插入单链噬菌体M13载体，并用合成的寡聚核苷酸引物与该载体上插入待测片段的上游顺序退火，随后在T7DNA聚合酶催化下进行延伸反应。实际操作中同时进行， ...

1）取10ul待测DNA，于一定浓度的琼脂糖凝胶上进行电泳。(20mL1.0%凝胶)2) 凝胶用溴化乙锭染色，切掉凝胶四周多余部分，并在凝胶的一角作一记号 拍照记录电泳结果(拍照时 凝胶旁放一尺子)。3) 杂交用胶的制备 (做以下步骤两组合一)A．将凝胶浸没入30mL 0.25mol/L HCl溶液中15min，使DNA脱嘌呤。B．用蒸馏水短暂洗凝胶2次。C．将凝胶浸没入30mL变性液中30m ...

物种的遗传多样性在本质上是DNA 一级序列的多样性。近年来，随着DNA 测序技术的迅速发展和日益普及，DNA 测序在遗传多样性的研究中正在起着越来越大的作用。本章将介绍目前在遗传多样性研究中常用的一种手动和一种全自动双链DNA 测序方法。1 DNA 模板的制备在遗传多样性的研究中，由于样本量一般都较庞大，因而DNA 测序的速度就成了很关键的因素。因此，这类研究中常常直接测定纯化的PCR 双链产物而 ...

一 基因组酶切和电泳在200 μl 微量离心管中加入：25 μl DNA样品(约10μg)，3μl 限制性内切酶（MBI，10 U/ μl）5 μl 相应的10×buffer，补水到50μl。然后加一滴矿物油覆盖 稍微离心后放于37℃水浴8-12小时。酶切完后，取5μl 酶切DNA样品于0.8%的琼脂糖凝胶上检测酶是否充分。如果酶切充分，灌制0.8%的agrose胶，加入上样buffer后，在25 ...

NCBI的“electronic PCR（e-PCR）”工具是UniSTS资源库的一部分，可以用来寻找一段目的DNA片段中的STS标记物。UniSTS (http://www.ncbi.nih.gov/genome/sts/ ) 能提供所有有关STS标记物的资料，包括引物序列、产物大小、作图信息和别名。与之相链接的其他NCBI资源如Entrez、LocusLink 和MapViewer 也同样提供 ...

【实验目的】 1．掌握DNA重组技术的基本原理和基本方法 2．熟悉质粒DNA的小量制备及酶切鉴定方法 【实验原理】 1．DNA重组技术 重组DNA(RecombinantDNA)技术是遗传工程的核心技术，也是人类在基因和DNA分子水平进行操作的技术。它包括以下几个步骤： 1）重组DNA分子的构建：即将目的基因（DNA或cDNA片段）与载体DNA重组，应用TA克隆方法将PCR扩增产物快速 ...

①取0. 2g 各中药材样品分别用液氮( Ⅰ) 、玻璃砂( Ⅱ) 、氧化铝( Ⅲ) 研磨。②加入56 ℃ 10 倍预热的缓冲液C 于56 ℃温育30 min 离心 取上清液加入等体积氯仿- 异戊醇(24∶1) 抽提(室温 不能低于15 ℃ 否则CTAB 会沉淀) 10 000g 离心15 min。③取上清液加入1/ 10 倍体积缓冲液D 于室温下放置15 min 再用等体积氯仿- 异戊醇( ...