DNA实验技术

胚胎干细胞的应用 胚胎干细胞是从着床前囊胚的内细胞团(innercellmass，ICM)经体外分离培养而建立的全能干细胞系。ES细胞具有三大特点：①体外未分化状态下大量繁殖，具有自我更新能力；②在一定条件下具有向3个胚层(内、中、外胚层)组织和细胞分化的全能性；③易于进行基因改造操作。自Evans及Martin等人成功地分离和体外培养了小鼠ES细胞(roES细胞)以来，人们对ES细胞的研 ...

骨髓基质干细胞的应用 研究表明，骨髓内含有多种干细胞，其中骨髓源的间充质干细胞又被称为骨髓基质干细胞(bone marrow stem cell，BMSC)。各国学者对动物来源的BMSC进行了大量的研究，结果证实可以在体内外定向分化为软骨细胞、成骨细胞及脂肪细胞等多种中胚层来源的细胞。BMSC是目前组织工程种子细胞研究的焦点。作为组织工程种子细胞具有以下优点：取材操作相对简单，对机体损伤小 ...

干细胞的基本特征(一)更新 干细胞能通过有丝分裂产生子代干细胞。干细胞的分裂过程与普通的体细胞有所不同。高等动物的成体干细胞通过不对称分裂产生非对称的细胞决定子分割，使得一部分子代获得维持干细胞状态所必需的信息而成为子代干细胞，另外一部分子代细胞则不得不走向分化。也就是说，一个干细胞的后代中，只有一部分子代细胞可能保持与父代细胞相同的干细胞特征，另外一部分则丧失了干细胞的功能。 干细 ...

脂肪干细胞的应用 脂肪组织是人体内含量十分丰富的组织。随着肥胖症患者的增多，人类脂肪开始“富余”，并渐成为累赘。人们一直以为，脂肪仅仅只有储存热量作用，过量储存会导致脂肪肝、血管硬化。殊不知，脂肪还蕴藏有十分稀缺的干细胞资源。Zuk等人将脂肪抽吸术后的脂肪细胞(processed lipoaspirate cell，PLA)收集、消化后进行体外培养研究。经过不同的细胞因子的诱导，PLA能够 ...

真皮内干细胞的研究 皮肤可能也含有大量多潜能细胞。皮肤包含表皮层、真皮层及附属器等多种结构，表面积巨大，细胞资源丰富。而且，皮肤位置表浅、易于取材。近来研究表明，真皮内同样存在具有多向分化潜能的细胞。新生鼠真皮细胞经诱导后，不但能向多种中胚层细胞分化，甚至在特定条件下还能向内胚层细胞如胰岛细胞分化。从成年啮齿动物毛囊的真皮乳头(dermal papilla，DP)结构中可获得间充质来源的D ...

骨髓基质干细胞修复颅骨缺损 1.实验动物 毕格犬，平均1岁龄，雌雄不限。氯胺酮10mg/kg肌内注射诱导后，肌内注射速眠新o.1m1/kg全麻，常规消毒、铺巾。16号骨髓穿刺针于髂前上棘或股骨近端穿刺，抽取骨髓3-5ml，置于50m1离心管中(所用器械均事先肝素化)。 2.BMSC培养及成骨诱导 3.细胞-生物材料复合物制备pDBM(脱钙骨基质，上海市组织工程研究与开 ...

骨髓基质干细胞的诱导分化 1.成软骨诱导 骨髓基质干细胞培养7天后，加入软骨诱导液，诱导因子终浓度为TGF-p1 10ng/m1、IGFl00ng/m1、地塞米松0.1/1m01/L，转铁蛋白6.25ug/ml，诱导时间为2-4周。 2.成骨诱导 (1)骨髓基质干细胞培养7天后，加入成骨诱导液。诱导液成分为基础培养液加入10mmo/Lβ-磷酸甘油、10nmol/L维生素 ...

骨髓基质干细胞的分离与培养 骨髓基质干细胞(BMSC)是最常见的成体干细胞，其操作流程比较稳定和成熟。即以BMSC为例，初步阐述成体干细胞具体应用步骤与流程。 (一)骨髓基质干细胞分离培养的准备工作 1.配制DMEM培养液 取DMEM培养基10g，NaHC03 2.2g，L-谷氨酰胺300mg，维生素C 37.5mg，青霉素10万单位，链霉素10万单位，加适量三蒸水充分溶 ...

从头预测法预测蛋白质的结构 从理论上说，从头预测法是最为理想的蛋白质结构预测方法。它要求方法本身可以只根据蛋白质的氨基酸序列来预测蛋白质的二级结构和高级结构，但现在还不能完全达到这个要求。从头预测可以细分为以下几种类型。 (一)二级结构预测 首先从一级结构预测出二级结构，然后再把二级结构堆积成三维结构。由于目前对二级结构中氨基酸的中远程相互作用不完全清楚，因此预测准确率一般在6 ...

蛋白质工程在医学研究中的应用一、提高蛋白质的稳定性 葡萄糖异构酶(G1)在工业上应用广泛，为提高其热稳定性，朱国萍等人在确定第138位甘氨酸(Glyl38)为目标氨基酸后，用双引钩法对GI基因进行体外定点诱变，以脯氨酸(Pr0138)替代Glyl38，含突变体的重组质粒在大肠杆菌中表达。结果突变型GI比野生型的热半衰期长1倍，酶比活性相同。据分析，PM替代Glyl38后，可能由于引入了一个 ...

蛋白质从头设计 成功地从头设计一个蛋白质或活性位点必须正确理解所有相关问题，尤其是理论及设计相当关键。由于设计的蛋白质是由一个算法(algorithm)、采用一组描述相互作用的参数而产生，因此在设计参数和蛋白质特性之间可以建立直接的实验联系。 (一)设计策略 设计的一般策略是“设计循环”(designcycle)，就是理论设计和实验验证交互进行，逐步发展。首先由一个算法，基于某 ...

生物信息学与药物设计和新药开发 生物信息学与生物医学领域另一个重要应用是药物设计和新药研发。生物信息学所提供的数据和软件可以指导对药物作用靶位的选定和药物分子的设计。这种方法有快速、高效的特点，它的研究范围包括大分子结构功能的模拟和预报、药物分子与大分子结合的模拟、生物分子在指定细胞的分布和位点等。 新药研究和开发是一项耗资巨大的工程。过去，每一种新药从研发到投入市场平均需要10～ ...

基因位点及信息获取的方法 NCBI的Map Viewer(http：//www．ncbi．nlm．nih．gov/mapview/)是常用的软件。NCBI的MapViewer支持以染色体位置来对基因组信息进行搜寻和展示，感兴趣的区域可以通过以基因或分子标记物的名称等文本查询或通过序列比对(BLAST)来获得，可在全基因组水平对结果进行展示或选择性地展示更详细的结果。多种选项可以用来设定展示 ...

比较基因组学，系统进化树 NCBI Entrez中的Blink(BLAS TLink)对寻找跨物种的蛋白质同源系和直系同源是一个很好的工具。Blink不是一个独立的工具，它是作为连接存在于NCBI Entrez的每一个蛋白质的记录中，Blink的词条(entries)是基于通过多对多的BLAST序列比对得到的结果，最好的前200个比对结果被呈现。在Blink的报告页面上，保守的蛋白质功能域 ...

从DNA序列查询单核苷酸多态性(SNP)的存在 用户可以应用Ensembl网页，选择适当的物种，通过关键词的搜索或通过针对基因组数据库BLAST查询的序列得到相关的基因组区域。在这两种情况下，用户通过点击在EnsemblGene Report页面上“Genomic Location"条框中的连接，可查询感兴趣基因的ContigView，在这个条框中，用户可以看到对于整个染色体而言的感兴趣基 ...

组织化学与免疫组织化学染色标本的石蜡包埋组织化学与免疫组织化学染色标本常用石蜡切片和冰冻切片。对于柔软的胚胎组织或脑也可用琼脂包埋后振动切片机切片。 用于免疫组织化学染色的石蜡切片(paraffin secdon)与常规HE染色的石蜡切片基本 制片过程相同。石蜡切片的优点是组织结构保存良好，结构清晰，能连续切片，抗原定位准确，更适合回顾性研究。固定好的组织在切片前要经石蜡包埋封 ...

防脱片处理步骤《一》载玻片和盖玻片的处理将载玻片或培养用的小盖片浸泡在重铬酸钾浓硫酸清洁液中24小时，然后流水充分冲洗，再用蒸馏水冲洗3遍以上，而后置95％乙醇中12小时。取出擦干或烤干，贮放于玻片盒内备用。盖玻片很薄，以上处理程序必须缩短时间，清洁液浸泡只需2小时，流水冲洗注意勿损伤玻片。《二》黏附剂的使用 1．多聚左旋赖氨酸(poly-1―lysine) 首先配制0．1％(ω/υ) ...

Feulgen反应步骤 标本需经固定后方可染色，Carnoy固定液可按无水乙醇：三氯甲烷：冰醋酸为6：3：1比例配制。固定后石蜡切片即可。尽量不用新鲜组织恒冷箱切片，因胞质中存在的缩醛磷脂会出现非特异染色。若必须使用恒冷箱切片，需做切片后固定。用已固定的组织石蜡切片可消除缩醛磷脂。减少非特异染色，具体操作如下： 1．切片脱蜡入水； 2．用lmol／L HCl浸洗； 3．切 ...

三维空间内随机抽样 我们不难发现对于所进行观察的切片，体视学有着自身的规定。同时，从统计学角度出发，不可能只在一张切片上观察计算便得到关于整个特征物的准确三维定量信息，故体视学必然存在其特有的抽样原则，而这些原则必须有效而且切实可行。体视学可称为形态结构的统计学，体视学测试过程，实际上是抽样过程。下面介绍体视学对切片的要求和如何进行标本抽样。 在体视学中经常用到“无偏(unbiaas ...

抗体的结构 抗体是能与抗原特异性结合的免疫球蛋白 (immunoglobulinIg)。Ig分五类，即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。与免疫测定有关的Ig主要为 IgG和IgM。Ig由两个轻链（L）和两个重链（H）的单体组成。Ig的轻链是相同的，有κ（kappa）和λ（Lambda ）两种型别。五类Ig的重链结构不同，这决定了它们的抗原性也不同。IgG和IgM的重链分别称为γ（gamma） ...