DNA实验技术

网络 第三节　分子杂交 　　一、概述 　　前面已经介绍了核酸分子单链之间有互补的碱基顺序，通过碱基对之间非共价键（主要是氢键）的形成即出现稳定的双链区，这是核酸分子杂交的基础。杂交分子的形成并不要求两条单链的碱基顺序完全互补，所以不同来源的核酸单链只要彼此之间有一定程度的互补顺序（即某种程度的同源性）就可以形成杂交双链。分子杂交可在DNA与DNA、R ...

网络 第三节　分子杂交 　　一、概述 　　前面已经介绍了核酸分子单链之间有互补的碱基顺序，通过碱基对之间非共价键（主要是氢键）的形成即出现稳定的双链区，这是核酸分子杂交的基础。杂交分子的形成并不要求两条单链的碱基顺序完全互补，所以不同来源的核酸单链只要彼此之间有一定程度的互补顺序（即某种程度的同源性）就可以形成杂交双链。分子杂交可在DNA与DNA、R ...

网络 第二节　DNA的变性与复性 　　一、DNA变性 　　DNA变性是指双螺旋之间氢键断裂，双螺旋解开，形成单链无规则线团，因而发生性质改变（如粘度下降，沉降速度增加，浮力上升，紫外吸收增加等），称为DNA变性。加热、改变DNA溶液的pH、或受有机溶剂（如乙醇、尿素、甲酰胺及丙酰胺等）等理化因素的影响，均可使DNA变性。 　　通常，可利用DNA ...

网络 第十八章　核酸分子杂交技术概述 第一节　核酸的分子结构 　　一、核酸的化学组成 　　组成核酸的元素有C、H、O、N、P等，其中N含量约为15%～16%，磷含量为9%～10%。由于核酸分子中的磷含量比较恒定，因此，核酸定量测定的经典方法，是以测定磷含量代表核酸量。 　　核酸经水解可得到多核苷核，因此核苷酸是核酸的基本单位，核酸就是由很 ...

网络 第八节　汗腺及汗腺肿瘤的免疫细胞化学特点 　　目前已有多种PcAb和McAb用于汗腺及汗腺肿瘤的研究，这些不同的抗体对汗腺的不同部位有特异性反应，主要用于探讨汗腺肿瘤的组织发生，分化特点以及诊断及鉴别诊断。同时也可用于外科手术切除时，迅速判断肿瘤是否切除干净。现将不同的抗体分述如下。 　　1．癌胚抗原（CEA）　出已证明在大小汗腺的腺体及导管 ...

网络 第八节　汗腺及汗腺肿瘤的免疫细胞化学特点 　　目前已有多种PcAb和McAb用于汗腺及汗腺肿瘤的研究，这些不同的抗体对汗腺的不同部位有特异性反应，主要用于探讨汗腺肿瘤的组织发生，分化特点以及诊断及鉴别诊断。同时也可用于外科手术切除时，迅速判断肿瘤是否切除干净。现将不同的抗体分述如下。 　　1．癌胚抗原（CEA）　出已证明在大小汗腺的腺体及导管 ...

网络 第七节　真皮浸润细胞免疫表达 　　一、T淋巴细胞及其亚群的免疫表达 　　CD3（OKT3，Leu4）对T细胞特异，正常或肿瘤性B细胞不表达CD3；CD4RO（UCHL1）大多数T细胞和T细胞淋巴瘤呈阳性表达，能用于石蜡切片中。二者是常规筛选T细胞的良好标记物。成熟T细胞可分为表达CD4（OKT4、Leu3a）T辅助（TH/I）细胞、CD8（OK ...

网络 第七节　真皮浸润细胞免疫表达 　　一、T淋巴细胞及其亚群的免疫表达 　　CD3（OKT3，Leu4）对T细胞特异，正常或肿瘤性B细胞不表达CD3；CD4RO（UCHL1）大多数T细胞和T细胞淋巴瘤呈阳性表达，能用于石蜡切片中。二者是常规筛选T细胞的良好标记物。成熟T细胞可分为表达CD4（OKT4、Leu3a）T辅助（TH/I）细胞、CD8（OK ...

网络 第六节　免疫细胞化学技术在真皮纤维化性疾病研究中的应用 　　真皮结缔组织由数量不多的细胞和丰富的细胞外基质组成。细胞成分包括成纤维细胞、肥大细胞、巨噬细胞和少量淋巴细胞等。细胞外基质包括：①胶原：真皮中胶原纤维由I型和II型胶原构成，成熟真皮中I型胶原约占胶原的85%，越年幼的皮肤含III型胶原的比例越高。②弹性蛋白。③非胶原糖蛋白：如纤维粘连蛋白。 ...

网络 第六节　免疫细胞化学技术在真皮纤维化性疾病研究中的应用 　　真皮结缔组织由数量不多的细胞和丰富的细胞外基质组成。细胞成分包括成纤维细胞、肥大细胞、巨噬细胞和少量淋巴细胞等。细胞外基质包括：①胶原：真皮中胶原纤维由I型和II型胶原构成，成熟真皮中I型胶原约占胶原的85%，越年幼的皮肤含III型胶原的比例越高。②弹性蛋白。③非胶原糖蛋白：如纤维粘连蛋白。 ...

网络 第五节　真皮与表皮交界 　　真皮与表皮交界不平。真皮乳头与表皮的突起部分（即表皮突）互相镶接。 　　一、基底膜带 　　（一）基底膜带（basement membrane zone BMZ）的结构 　　基底膜带位于表皮真皮连结处，用PAS染色光学显微镜下所见为0.5～1μm厚的均匀一致的紫红色带，称为表皮下基底膜带。 　　1．B ...

网络 第五节　真皮与表皮交界 　　真皮与表皮交界不平。真皮乳头与表皮的突起部分（即表皮突）互相镶接。 　　一、基底膜带 　　（一）基底膜带（basement membrane zone BMZ）的结构 　　基底膜带位于表皮真皮连结处，用PAS染色光学显微镜下所见为0.5～1μm厚的均匀一致的紫红色带，称为表皮下基底膜带。 　　1．B ...

网络 附录四　实验室常用技术参数资料 　　一、核酸及蛋白质常用数据 1．核苷三磷酸的物理常数 化合物 分子量 λmax(pH7.0) 1摩尔溶液（pH7.0）中λmax时的最大吸收值 OD280/OD260 ATP 507 259 15400 0.15 ...

网络 附录四　实验室常用技术参数资料 　　一、核酸及蛋白质常用数据 1．核苷三磷酸的物理常数 化合物 分子量 λmax(pH7.0) 1摩尔溶液（pH7.0）中λmax时的最大吸收值 OD280/OD260 ATP 507 259 15400 0.15 ...

网络 附录三　全血细胞培养染色体技术常用试剂配制 　　一、国内实验室应用试剂配制 　　（一）培养液 　　（1）RPMI1640培养液：称取RPMI培养基9.8g，碳酸氢钠1.9g、青霉素100u/ml，加双蒸水至1000ml，调节　pH7.2～7.4无菌过滤冻存备用。 　　（2）小牛血清商品：成都生物制品厂。 　　（3）植物凝集素（ ...

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网络 附录二　原位杂交组织化学常用试剂及处理 　　一、杂交前准备 　　（一）DEPC水是经DEPC处理过的灭菌蒸馏水。 　　DEPC即二乙基焦碳酸酯（diethylprocarbonate），可灭活各种蛋白质，是RNA酶的强抑制剂。原位杂交在杂交及其以前的各步处理中，所有液体试剂都应经DEPC处理。方法是：取市售DEPc 1ml，加入1L待处理 ...

网络 附录二　原位杂交组织化学常用试剂及处理 　　一、杂交前准备 　　（一）DEPC水是经DEPC处理过的灭菌蒸馏水。 　　DEPC即二乙基焦碳酸酯（diethylprocarbonate），可灭活各种蛋白质，是RNA酶的强抑制剂。原位杂交在杂交及其以前的各步处理中，所有液体试剂都应经DEPC处理。方法是：取市售DEPc 1ml，加入1L待处理 ...

网络 附录一　免疫细胞化学常用试剂介绍 　　一、固定剂 　　大多数神经激素、肽类物质为水溶性，在用于免疫细胞化学研究之前，常需固定。但肽类和蛋白质的物理、化学性质不同，因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不尽相同。某些固定剂甚至可同时破坏和/或保护同一抗原的不同抗原决定簇。因此，在进行免疫细胞化学研究之前，很有必要了解所要研究的物质（蛋白质或肽类）的 ...

网络 附录一　免疫细胞化学常用试剂介绍 　　一、固定剂 　　大多数神经激素、肽类物质为水溶性，在用于免疫细胞化学研究之前，常需固定。但肽类和蛋白质的物理、化学性质不同，因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不尽相同。某些固定剂甚至可同时破坏和/或保护同一抗原的不同抗原决定簇。因此，在进行免疫细胞化学研究之前，很有必要了解所要研究的物质（蛋白质或肽类）的 ...