DNA实验技术

相关专题 DNA双螺旋结构的前前后后 如果把正常线形双螺旋DNA分子沉降系数定为1，那么： 1、Ⅰ形DNA 具有负超螺旋或正超螺旋的双链闭环状分子沉降系数为1.41 2、Ⅰ°形DNA 无超螺旋的双链环状分子，沉降系数1.14。 3、Ⅱ形DNA 一条链上或两条链上有一个或几缺口的双链环状分子，沉降系数为1.14 4、Ⅲ形DNA 线形双螺旋分子， ...

相关专题 DNA双螺旋结构的前前后后 Chargaff定律： (1)碱基当量定律:嘌呤碱总量=嘧啶碱总量即A+G=T+C (2)不对称比率A+T/G+C因物种(亲缘关系远近)而异 DNA双螺旋结构模型中，A只能和T配对，G只能和C配对，也就是说A的数量和T相等，G的数量和C相等，所以A+G=T+C; ...

相关专题 DNA双螺旋结构的前前后后 单链的DNA分子和RNA分子的区别只是五碳糖的第二位C上面基团的不同，DNA为H原子，而RNA为OH基团。 当在水中这样一个强极性的环境中，H为中性，OH有强烈的极性，便可以和水分子形成氢键，所以我认为ssRNA比ssDNA稳定。 如果是双链DNA那么 因为DNA独特的双螺旋结构比单链的RNA更稳定 具体 ...

相关专题 DNA双螺旋结构的前前后后 DNA分子携带了蛋白质氨基酸组成的信息和基因选择表达的信息。 与生物学和基因表达有关的大部分信息存在于长程力所引起的低频振动，使DNA的各部分序列间进行长距离对话。 RNA碱解先得一2’、3’环式核苷酸中间产物，由于五元环稳定性差，很快变成2’核苷酸、3’核苷酸的混合物。 碱基平面与螺旋基本上是垂直的，嘌 ...

相关专题 DNA双螺旋结构的前前后后 双螺旋是指DNA的结构，是DNA长什么样子。而DNA重组，是构建新DNA的一种方法，是一种技术，一种手段，是指将来自不同物种的dna拼接起来的一种技术。 也许你要问的那句话是：dna重组技术的理论依据是dna具有双螺旋结构 ...

相关专题 DNA双螺旋结构的前前后后 沃森 Watson James Dewey 美国生物学家 克里克 Crick Francis Harry Compton 英国生物物理学家 20世纪50年代初，英国科学家威尔金斯等用X射线衍射技术对DNA结构潜心研究了3年，意识到DNA是一种螺旋结构。女物理学家富兰克林在1951年底拍到了一张十分清晰的D ...

相关专题 RNA干扰技术 RNAi的作用机制 RNAi 的作用体现在两种水平上 ①转录水平。RNA 可以介导DNA 的甲基化(RNA-directed DNA methylation RdDM) 最早发现于一种植物的类病毒系统。dsRNA(double-strand RNA) 被降解成21～23 个核苷酸长的小片段RNA 时，这些小的RNA ...

相关专题 DNA连接与转化 胶回收DNA注意事项 ①切胶回收DNA片段是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。所以为了减少胶的体积，我们 就可以用相对比较薄的胶来跑电泳，通常只要够点样即可，或是采用薄而宽的梳子来跑胶。这样可减少回收试剂引起的一些后续麻烦。 ②主要还是DNA的浓度 如果DNA浓度不够 想胶小点也不可能。 ③紫外灯下切下含待回收 ...

相关专题 DNA连接与转化 DNA胶回收中常见问题分析 1、如何计算提取率? 1) 回收前样品中，往往含有非目的DNA 片段、引物、dNTP 等，所以不能用测回收前后吸光度的的方法计算回收率; 2) 可将回收前后DNA 片段一起电泳，使用凝胶成像系统拍照后，用配套的软件进行电泳条带灰度对比; 3) 注意，电泳条件及拍摄条件将对灰度对比结果造成 ...

相关专题 DNA连接与转化 Q：利用凝胶回收试剂盒DNA回收效率较低或者未回收到目的片段? A： 可能有以下几个原因： 1. 胶块未完全溶解，可适当延长水浴时间，并增加上下颠倒次数辅助溶解; 2. 胶块体积太大，应先将其切为小块，分多次回收; 3. 电泳缓冲液pH太高，硅基质膜在高盐低pH结合DNA，如pH太高，应作适当调整; 4. 漂洗液中 ...

相关专题 DNA连接与转化 从琼脂糖中回收DNA片段 实验目的： 掌握从琼脂糖凝胶中回收DNA片段的技术。 DNA片段的胶回收： 电泳洗脱法 低熔点琼脂糖凝胶电泳挖块法 冻融回收法 玻璃奶回收法 柱回收法(按说明书进行) 胶回收注意事项： 将电泳槽用ddH2O反复清洗干净，倒入新鲜配制的灭菌电泳缓冲液; 根据点样量制备合适厚度的琼脂糖凝胶板; ...

相关专题 DNA连接与转化 胶回收DNA片段 一、 实验目的 1、 了解分离纯化DNA片段中的污染物方法和原理 二、 实验原理 首先利用低熔点琼脂糖凝胶电泳DNA片段，分离目的条带DNA，然后紫外光下切割含目的DNA条带的胶块，利用胶回收试剂盒回收纯化DNA片段。试剂盒的胶回收柱采用特殊硅基质材料在一定的高盐缓冲系统下高效、专一地吸附DNA、 ...

相关专题 DNA连接与转化 胶回收方法全攻略 说到电泳凝胶的片断回收，想来在实验室久已的“老手”们都会不屑一顾。确实，一般在各个和分子生物学沾到一点边儿的实验室里，从琼脂糖凝胶中回收DNA，仅仅是一种简单不过的常规实验操作。虽说早期的凝胶电泳片断回收没有1—2个小时是搞不定的，每个实验室也有自己的独门秘诀，可后来各大品牌纷纷推出了了多种不同用 ...

相关专题 DNA连接与转化 该问题看似什么简单： DNA中加上酶，然后保温一段时间就可以了。但是在实际操作过程中，我们不断听到：切不动，装不上。问题在什么地方?能系列生产限制性内切酶的公司国际上，就那么几个，位列前3 的是NEB Fermentas SibEnzyme。这些公司提供酶的品质一般都能得到保证。您可以怀疑酶的质量问题，但是更多的问 ...

相关专题 DNA连接与转化 一、原理 回收目的片段的方法很多，常用的有冻融法，低熔点琼脂糖法，透析代法、电泳回收法、玻璃孔回收法等。本实验采用电泳回收法。通过特别的 V 形电泳槽，将挖出的含有目的片段的凝胶置于 V 形槽前，接通电泳电源， DNA 即进入 V 形管中，回收 V 形管中溶液即可， V 形管较小，回收的 DNA 片段能保持较高的浓 ...

相关专题 DNA连接与转化 1、未回收到DNA片段或回收效率很低 A、原因：胶块未完全溶解 建议：为加快凝胶的溶解，应将凝胶置于55度水浴中溶解，期间不断上下颠倒，待确定凝胶完全溶解后再进行后续操作。每100 mg凝胶应加入100uL溶胶液，如果胶块过大，应将胶块切成小块，以便于凝胶溶解。 B、原因：加入溶胶液过少 建议：对于PCR产物，或者 ...

相关专题 DNA连接与转化大肠杆菌的基因工程 Prepare: 200ml LB in a 1L flask 1L sterile ddH2O and place in cold room 4 50ml conicals chilled on ice 10% glycerol (cold) Chilled boxes of 100ul and ...

相关专题 DNA连接与转化 法一 A液：1M，MnCl2： B液：1M，HEPES，pH=6.2-6.8，用无菌水配，配后不需灭菌; C液 称取CaCl2 0.10g，KCl 1.18g，全部转入细口试剂瓶，然后加入46ml三蒸水，轻轻振荡使所有组分充分溶解。将瓶塞盖上并用牛皮纸、棉线包扎，然后放入灭菌锅121℃高压灭菌备用。 取1管B液(0 ...

相关专题 DNA连接与转化质粒大肠杆菌的基因工程 感受态的制备 (1)接种单菌落于2ml LB培养液中， 37℃过夜。 (2)取0.25ml过夜菌入25ml LB培养液中，37℃振摇4～6h至A590=0.4～0.6。 (3)倒入50ml管内，水浴10min，以2500～3000rpm离心5min，弃上清。 (4)缓慢加入75mmol/L预冷 ...

相关专题 DNA连接与转化大肠杆菌的基因工程 SS方法制备感受态细菌(又称一步法) 一、 准备工作 1、 缓冲液1×TSS的配制： 事先配制1M的氯化镁——20.3g氯化镁(6分子水结晶)/定容于100ml去离子水后封装，不用灭菌。 取干净的100ml 量筒和100ml 烧杯，用量筒量取100ml去离子水，加入至烧杯中，取 1 g 蛋白胨，0 ...