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        DNA目的片段的回收方法

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        相关专题
        DNA连接与转化

        一、原理

        回收目的片段的方法很多,常用的有冻融法,低熔点琼脂 糖法,透析代法、电泳回收法、玻璃孔回收法等。本实验采用电泳回收法。通过特别的 V 形电泳槽 ,将挖出的含有目的片段的凝胶置于 V 形槽前,接通电泳电源, DNA 即进入 V 形管中,回收 V 形管中溶液即可, V 形管较小,回收的 DNA 片段能保持较高的浓度。

        二、实验步骤

        1. 大量酶切产物的电泳分离:琼脂糖为 0.8 %,选用大型电泳槽及厚梳子,并载低电压下电泳以提高分辨率。

        2. 紫外灯下用刀片小心切出含 1000bpDNA 片段的凝胶。

        3. 把凝胶片置于特制的 V 型槽平台上,在 V 型槽中加入 0.5 × TBE 电泳缓冲液(使其刚好淹过胶面),再在 V 型孔中加入 7MNH 4 Ac ,接通电源进行电泳。

        4. 紫外灯下检测凝胶块是否含有 DNA ,判断 DNA 是否全部进入 V 形管溶液中。

        5. 当 DNA 进入 V 形管中,放掉电泳槽中的缓冲液,吸出 V 形管中的溶液。

        6. 溶液加两倍体积的无水酒精,混匀,置- 70 ℃ 两小时或者- 20 ℃ 过夜。

        7.1200rpm 离心 10 分钟,沉淀用 70 %酒精洗一次,风干,加入 10ul 与 8ul TE 及 1ul 载样缓冲液混合,电泳检查并根据带的亮度估算其浓度。

        三、注意事项

        挖含目的 DNA 的凝胶时,尽量减少周围凝胶的带入。

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