DNA实验技术

Introduction:One microarray set consists of 7 nylon membranes with 2.5 x 7.5 cm dimension. 2304 genes were spotted onto nylon membranes (Schleicher and Schuell GmbH Dassel Germany) using a GMS417 Micr ...

基因工程：将不同的生命元件按照类似于工程学的方法组装在一起，生产出人们所期待的生命物质。内含子，外显子：一个基因往往由几个互不相邻的段落组成，它的内部还包含一段或几段最终不相应出现在成熟mRNA中的片段，称为内含子。而相应出现在成熟mRNA中的片段则称为外显子。基因：是一个含有特定遗传信息的核苷酸序列，它是遗传物质的最小功能单位。蛋白质的一级结构：多肽链的氨基酸顺序。蛋白质的二级结构：多肽链中有规 ...

专题一：RNA干扰技术（RNAi）1995年，康奈尔大学的Su Guo博士用反义RNA阻断线虫基因表达的试验中发现，反义和正义RNA都阻断了基因的表达，他们对这个结果百思不得其解。直到1998年， Andrew Fire的研究证明，在正义RNA也阻断了基因表达的试验中，真正起作用的是双链RNA。这些双链RNA是体外转录正义RNA时生成的。这种双链RNA对基因表达的阻断作用被称为RNA干预（RNA ...

基因疗法是指将正常基因植入靶细胞代替病人细胞中的遗传缺陷基因，或关闭、抑制异常表达的基因，以达到预防和医疗疾病目的的一种临床医疗技术。在治疗遗传性疾病、恶性肿瘤、癌症、艾滋病病毒（HIV）、关节炎、糖尿病、腺苷脱氢酶(ADA)缺陷症、神经系统紊乱、心脏病等疾病方面，基因疗法发挥着越来越重要的作用。基因治疗中最重要的一个环节是选择适当的基因载体(Vector)。基因治疗载体一般分为病毒性载体和非病毒 ...

基因突变是指由于DNA碱基对的置换、增添或缺失而引起的基因结构的变化，亦称点突变。它的分类方式包括1）根据基因结构的改变方式，基因突变可分为碱基置换突变和移码突变两种类型；2）根据遗传信息的改变方式，基因突变又可以分为同义突变、错义突变和无义突变三种类型。基因突变的检测方法：从基因突变的性质来看，检测方法分为显性突变法、隐性突变法和回复突变法三类。广义的突变？检测可以从两个层次来入手：一个是蛋白质 ...

1 如果是染色体畸变，你可以用正常细胞的染色体与药物处理过的细胞的染色体对照进行检查，大致确定好事那个染色体后用FISH技术来检测染色体2 如果是基因发生了点突变，首先要明确是那个基因会有发生突变的趋势，采用SSCP（单链构象多态性）确定是否发生有突变，然后用测序法验证3 如果已知该药物所导致的突变，就可以采用测序，单碱基延伸法等方法进行检测 ...

一、核酸的纯化　　在分子克隆的所有操作中，最基本的操作是核酸的纯化。其关键步骤是去蛋白质，通常只要用酚/氯仿。氯仿抽提核酸的溶液即可。每当需要把克隆有某一些所用的酶灭活或去除以便进行下一步时，可进行这种抽提。然而，如要从细胞裂解液等复杂的分子混合物中纯化核酸，则要先用某些蛋白水解酶消化大部分蛋白质后，再用有机溶剂抽提。这些广谱的蛋白酶包括链霉蛋白酶及蛋白酶K等，它们对多种天然蛋白均有活性，（1）用 ...

该技术在应用的过程中，肯定需要在实验条件上不断进行改进，而这种改进的好坏自然而然需要实验结果的验证。。V. Grüntzig在2002年做了该工作的一部分，结果认为，在限制性酶切时，很有必要去除其中影响DNA的酶切过程，并且实验证明了具体的酶切时间。具有说服力的结果如下： 1，T-RFLP出数据的速度快，不过只是具有半定量性；2，DNA片断的分离有两种常用的方法：1。1 凝胶电泳，近来使用的比较 ...

DNA抽提（主要内容如下）・ Working with DNA ・ DNA Extraction from Bacteria and Other Organisms ・ DNA Extraction from Cell and Tissue ・ Mitochondria DNA Isolation ・ DNA Extraction from Plants Fly Fungal ...

DNA的酶学操作DNA Modifying Enzymes (Michael Blaber)Introduction to bacterial restriction/modification system. It provides very useful background knowledge about restriction digestion DNA Modifying Enzym ...

DNA转化Chemical Transformation・ Transformation of Competent Cells (RbCl2 Method) (Goldberg Lab)Very nice protocol for E. Coli transformation including competent cell preparation and recipes・ ...

DNA克隆（主要内容如下）・ General Procedure ・ PCR Cloning ・ Subcloning ・ ET Cloning ・ Vector Preparation ・ Ligation Reaction ・ Colony Screening General Pro ...

In this section you will find techniques related to oligonucleotides such as oligo purification by acrylamide gel annealing two oligos to make double stranded DNA and visualization by UV shadowing an ...

Also see DNA Cloning§ Making TA Vector (Crawford Lab)T-vectors are linear-blunt-ended plasmids with a few dT's added on by Taq polymerase.§ Making TA Vector (Mounir Izallalen)§ ...

・ In Vitro Mutagenesis Using Altered Sites (Bowtell Lab)In vitro Mutagenesis with dut ung single stranded DNA (Hahn Lab) ・ Site-directed Mutagenesis using PCR (Lazo Lab)PCR site-direc ...

・ Protocols for Making Drosophila Arrays (Stanford U.)Detailed protocol for making arrays including PCR Amplification of cDNAs for Printing Polylysine Slide Preparation "Post-Processing" and ...

RNA点线杂交（Dot and Slot blotting）・ RNA dot blot and slot blot (Beverly Faulkner-Jones)This methods allows the rapid analysis of numerous small samples for the sequence of interest and is less tim ...

・ What's Differential Display (GenHunter)Introduction to differential display technique・ Differential Display (Chun-Ming Liu)The following procedures are described:o RNA extract ...

Modified Eberwine ("antisense") RNA Amplification Protocol (The MGuide Brown Lab) In Situ RT-PCR (Bo Johansen) ...

・ In Vitro RNA Transcription (Promega)For in vitro preparation single-stranded RNA probes or microgram quantities of defined RNA transcripts from cloned DNA inserts. ・ In Vitro RNA Tra ...