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摘要：外泌体是一种由细胞主动分泌的纳米级脂质双层囊泡，其腔内或脂质双分子层中包裹着蛋白质、脂质和核酸等多种生物成分。外泌体具有低免疫原性、高物理化学稳定性、高组织穿透能力，以及先天的运输能力，因此有望成为一类新型的药物递送载体。目前，外泌体作为药物递送载体的研究已取得了可喜的进展，有关外泌体分离以及提高其药物负载和递送效率的新方法不断涌现。然而，仍有许多困难制约了外泌体的临床应用。综述了外泌体作为药物递送载体的研究进展，对外泌体大规模生产和纯化中的技术难点进行了分析，并总结了外泌体用于药物递送的法规问题。1 外泌体简介细胞外囊泡（extracellular vesicle，EV），根据大小、功能、来源的不同，可分为 3 种类型：外泌体、微囊泡和凋亡小体。外泌体是多囊泡体与细胞膜融合后分泌的直径为 30 ~ 150 nm 的 EV，微囊泡是细胞膜通过出芽直接脱落的直径为 100 ~ 1 000 nm 的 EV，凋亡小体是细胞在凋亡过程中释放的直径为 50 ~ 5 000 nm 的 EV。EV 是由大多数细胞通过多种机制形成的异质性细胞衍生囊泡。EV 通过多种体液（如血液、淋巴液、唾液、脑

外泌体研究之超滤浓缩操作详解

如何更好开展 MSC 细胞培养，进而获得更多优质的外泌体。

外泌体药物载体进展，以及开发技术的挑战等内容

高质量组织外泌体如何提取

如何更好培养肿瘤细胞和 T 细胞，进而获得更多优质的外泌体。

为了聚焦业务需求、提供更好的外泌体科研服务质量，恩泽康泰一向不贪婪，一心搞“人/小鼠/大鼠”临床科研外泌体服务产品，所谓干一行爱一行干好一行，直到今天我们在外泌体组学领域已经与临床客户深度合作发表了150+ SCI文章（其中部分高水平SCI文献已解读，请查阅《合作成果》合辑）。从2017年6月1号成立到2024年3月底近7年耕耘，从最初开发的专利Exosupur®外泌体纯化试剂盒到集细胞上清/血浆/二次纯化袖珍柱Exos ...

深入细胞生物学的世界，探索超分辨显微镜的全新进展

Evident 产品专家经验分享

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研究背景「应激」是抑郁症发病的主要原因，然而，当面对应激和创伤时，并不是所有人都将发展为抑郁症，甚至有些抑郁症患者能够「自复原」，提示机体存在对抗负性应激的能力，称为「心理韧性」。「心理韧性」是指机体以健康的方式从应激、创伤或长期逆境中恢复的能力。阐释「心理韧性」的生物学机制可能为精神疾病防治开辟新途径。研究内容与结果2023 年 3 月 30 日，琶洲实验室朱心红教授研究团队在 Cell 在线发表题为 A thalamic-primary auditory cortex circuit mediates resilience to stress 的研究成果[1]。该工作发现了面对应激时，抑郁非易感小鼠内侧膝状体谷氨酸能神经元形成超极化，引起初级听皮层的 PV（parvalbumin）神经元一方面启动内源性稳态机制维持其兴奋性，另一方面，促进相邻的兴奋性神经元释放脑源性营养因子，作用于内侧膝状体投射神经元的末梢，从而增强丘脑—皮层环路功能对抗应激；抑郁易感小鼠缺乏类似的「韧性」机制。该研究为阐释内源性「心理韧性」机理提供了新思路。研究人员首先基于经典的抑郁模型---社会失败模型（Chr

本文作者：陈小青 博士华东师范大学化学与分子工程学院研究背景异质性是细胞膜生物物理化学最重要的特性之一。细胞膜上富含胆固醇/鞘脂的高度动态的结构域，被称为脂筏。脂筏充当信号分子组装平台，参与多种信号转导过程。然而，由于脂筏高度动态特性，成像技术难以对活细胞上脂筏实时成像，因而脂筏动态组装过程与下游信号通路间的难以建立定量关联。近期，华东师范大学李迪教授团队与中国科学院上海有机化学研究所生物与化学交叉研究中心葛一凡副研究员合作，提出利用局域温度变化扰动细胞膜功能域分布的策略[1]。作者利用 DNA 折纸技术制备了兼具高空间分辨和化学分辨的光热响应分子工具，通过近红外激光操纵局部脂质环境温度来扰动脂筏的相分离程度（图 1）。相关研究工作以「高空间分辨热操纵细胞膜异质性改变细胞迁移及信号通路（High Spatial-resolved Heat Manipulating Membrane Heterogeneity Alters Cellular Migration and Signaling）」为题，发表在Proceedings of the National Academy of Sci

本文作者：崔琴琴浙江大学脑科学与脑医学学院白戈课题组腓骨肌萎缩症（Charcot-Marie-Tooth neuropathies，CMT）是一组临床上常见的周围神经遗传病，发病率约为 1/2500。根据致病基因的不同， CMT 可分为几十种不同的亚型。就 CMT 患者总数而言，在全国范围内是一个非常庞大的数字，然而具体到某些亚型的患者数量却非常稀少，因此 CMT 被收录到国家《第一批罕见病名录》。研究背景长久以来令人困惑的是，这几十种 CMT 致病蛋白在细胞中的定位和生理功能各异，似乎没有任何明显的共性，然而这些突变蛋白却会导致 CMT 患者表现出非常相似的临床症状。这个被称之为「疾病遗传异质性」的谜团长期以来一直困扰着广大神经科学家和临床工作者。有没有可能不同的致病蛋白最后通过一个「殊途同归」的共同机制引发相似症状？在过去几十年的研究中，领域内逐渐形成了一个共识：大多数神经系统疾病的发生都是遗传因子和环境应激因子共同作用的结果 [1, 2]。当细胞面临各种不良环境刺激时（如营养缺乏、高温、辐射等），细胞内一个重要的应激机制就是形成应激颗粒（Stress granule，SG），SG

如何注明获取图像时所使用的显微镜：系统配置中可能涉及大量的显微镜组件，在提及成像方法时，考虑到诸如荧光或相衬等许多成像技术需要使用多个专门的组件来实现其最终结果，情况就变得更加复杂。显微图像所应涵盖的细节清单，通常，在注明显微镜配置时，可能需要包含以下信息：显微镜的型号和制造商物镜放大倍数和数值孔径一定要注明是否为专业物镜，如相衬型，或是否使用油作为浸镜介质观察方法的细节，如明场或荧光。 如果使用荧光，请注明使用的滤镜/照明装置的波长和制造商。成像检测器（通常为相机）的型号采集所用的成像软件环境条件或处理，如培养或气体控制鸣谢机构工作人员或纳入作者署名：大多数情况下，一个研究项目从构思到发表需要多人参与。对实验设计的开发有贡献，为研究者定制了分析工具，以供研究中使用的情况，则应考虑将他们加入您的作者名单。成像机构和其他显微镜专家可以为您提供帮助，甚至指导实验者如何注明信息，帮助提供任何仪器资助方面的信息，并就其首选的信息标注方法为实验者提供指导。

实验室关闭、计划休假或突发紧急情况都可能会让您放下手头的研究。以下是重返实验室启动和展开试验的四步指南1. 为设备接通电源以错误的方式为设备接通电源可能会对系统性能造成负面影响。以下为需要遵循的一些通用准则：首先启动 PC 计算机：打开系统所有硬件：根据系统情况不同，可能需要特别注意打开硬件的顺序。比如说，在打开触控屏 TPC 之前必须先接通奥林巴斯系统控制器 CBH 电源。有关具体说明，请参阅手册。启动软件：如果在软件启动过程中遇到错误，请与产品技术人员咨询。2. 准备成像设备接通电源后，需要花一些时间适当准备、放置和调平样品才能进行成像。准备样品首先，选择适当的盖玻片。盖玻片应为 1.5 或 0.17 毫米厚（170 微米）。配合盖玻片使用的奥林巴斯物镜需要合适的厚度才能获得良好的图像质量。如果盖玻片太厚或太薄，可能会出现光学伪影。务必检查盖玻片的厚度，并使用标准载玻片。某些应用可以使用塑料载玻片。但对于荧光成像而言，塑料具有自发荧光特性。它会在蓝色和绿色通道（有时在红色通道）中产生明显的背景。另外在成像之前清洁盖玻片和载玻片也非常重要。比较好用的清洁溶液为蒸馏水稀释的 70% 乙

荧光成像需要维持一个微妙的平衡。一方面需要采集足够强的信号，这可以通过延长曝光时间或增强激发光实现。另一方面，需要通过缩短激发时间和降低激发光强度来最大限度降低样品条件下的光毒性。探索如何利用显微镜相机实现这一平衡的最佳方法。使用直方图直方图可以帮助确定理想的曝光时间。直方图就是反映信号强度分布的图。直方图的X轴代表信号强度。数据分布范围为零到相机最大信号强度。每个 X 值对应的直方图高度代表了该信号强度下的像素数量，如下图 1 所示。图 1：图像的直方图。（a）原始图像，（b）原始图像中每个像素的信号强度，（c）根据原始图像得到的直方图直方图的形状和分布可以帮助我们判断当前的曝光时间是否合适。在大多数荧光成像情况下，多数像素为没有信号的深色背景，这会导致直方分布图在背景强度附近出现峰值。如果直方图过于集中于低信号区域，则说明曝光时间太短（图 2，中）。如果其在最大信号处出现陡壁，则说明信号值已达到饱和（图 2，右）。这种情况下，可以降低激发光强度或缩短曝光时间。图 2：正常曝光（左），曝光不足（中）和在黄色标记处曝光过度（右）的直方图。让显示动态范围与数据动态范围匹配某些图像采集软件

生物学自发荧光定义是自发荧光是生物结构天然发出的光，是广泛存在于细胞和组织中的一种现象。这种现象由内源性分子组成成份呈现的荧光能力引起。与染色剂和染料中使用的经过设计的荧光染料一样，自发荧光分子通常包含多环碳氢化合物，具有可被入射光子激发的离域电子。自发荧光分子在受到入射光刺激后，会显示出对有效振动弛豫的耐受。因此，多余的能量会作为一个新光子被发射出去，与激发的光子相比，这种光子能量比降低，波长升高。目前已知，有少数内源性分子（如甲壳素），在紫外线刺激下会发出荧光（见图 1，左）。然而，与研究者在实验室看到的经过设计的荧光染料相比，许多自发荧光体不太可能被入射光子激发。经过设计的造影剂的浓度同样可以在台式染色方案中进行调整，以限制或加强荧光信号，但天然自发荧光始终受生物浓度限制。图 1. 活体样品中的自发荧光示例。左图：紫外线（UV）刺激下蝎子的自发荧光。右图：外伤后 10 天的大鼠皮肤恢复图像，显示新血管在表皮层向伤口切口垂直生长。蓝色（DAPI）：细胞核。橙色（自发荧光）：皮肤组织。红色（CD31）：血管。使用奥林巴斯BX51宽场荧光显微镜和 DP71 相机拍摄的图像。图像由中国中

实现活细胞成像自动化以及简化任务对于达到实验目标至关重要。这里介绍 4 个需要留意的技巧：1. 让标本在温暖、稳定的环境中保持健康状态活细胞成像过程中最大挑战之一就是如何在温暖舒适的培养箱之外确保样品健康并能够在显微镜下表现正常。可以利用能够为细胞提供稳定温度、湿度和 CO 2 密度的显微镜专用载物台上式培养箱或封闭式培养箱确保您的标本环境尽可能适宜。另外可以加热物镜，否则其作为寒冷的接触源可能会损害样品的健康。注意，微孔板外围区域可能存在比中心区域更高的环境波动风险，因此务必使用中心区域的孔，并避免使用边缘附近的孔影响稳定性。比如说，使用的是 96 孔板（12×8 孔），就只使用中心的 60 孔（10×6 孔）进行实验。图 1.载物台上式培养箱2.通过创造稳定的环境温度改善聚焦效果需要考虑的因素是室内温度，细微的温度变化也会影响到成像性能。显微镜的环境温度稳定性对于活细胞的高倍率观察尤其重要。由于高数值孔径观察的景深较浅，因此即使温度变化造成很小的Z漂移，系统也可能会因此离焦。为了优化环境条件，开始实验之前请确保打开空调并保持室温稳定。另外为了提高稳定性，还要避免气流从空调直接吹向显

1. 观察更多样品倒置显微镜载物台采用诸如 160×110 mm 尺寸 K 接口的通用底座标准，可以选择用于处理各种样品的载物台插件。这样可以观察多个培养皿或多个载玻片，可以同时进行实验，节省大量时间。这种方法减少了用于更换标本和设置常规实验的时间。图1.通过用在显微镜载物台上放三个培养皿取代放置一个培养皿，可以缩短用于实验准备和设置优化的时间，继而缩短了在实验室停留的时间2. 加快速度接下来就是优化图像采集速度。通常拖慢图像采集速度的瓶颈是滤色片或荧光镜组的机械切换过程，可以尝试以下方法：优化图像采集顺序：如果采集 Z 序列图像时的Z轴移动速度快于荧光滤色片的更换速度，则应现在一个荧光通道采集Z序列图像后，再转到下一荧光通道的方式进行（图 2，中间）。结合使用多通滤色镜组和 LED 光源：一些显微镜技术无需权衡取舍就能够实现某些改进。LED 光源和多通滤色片组合就是其中之一。尽管每个通道的单通专用滤色片通常是防止荧光串色的理想解决方案，但最新 LED 光源足够锐利的光谱可以避免串色并具备快速波长切换功能。这可以利用多通滤色片的优势缩短图像采集时间。使用多通滤色片的一个技巧是，尽可能使

1. 使用后立即将油清除干净。干燥的油很难从物镜上清除，而且容易附着灰尘、污垢、指纹和其他污染颗粒物。少量灰尘会影响图像质量，并导致产生诸如阴影或雾之类的光学问题。随着时间的推移干燥后的油会导致物镜性能下降。因此，建议在使用后立即将浸没油从物镜上清除。2. 使用目镜检查物镜上的灰尘。物镜通常尺寸很小，很难发现镜头上的灰尘。只需从显微镜上取下目镜，然后将其朝向物镜进行检查即可，就可以透过目镜放大任何需要清洁的灰尘。如果手边有放大镜，也可以使用放大镜。有时候物镜在显微镜上固定得过紧，无法取下进行检查和清洁。在这种情况下，可以将物镜调整到能够轻松清洁的角度。3. 使用吹气球清除灰尘。在检查完透镜之后，开始清洁过程。第一步，使用吹气球清除物镜上的所有灰尘或颗粒物，但不要碰到物镜。4. 用擦镜纸折叠成一个点。拿出一张新的擦镜纸，将其折叠出一个点。注意，折叠擦镜纸的方法与物镜大小有关。对于大尺寸物镜，只需将擦镜纸缠绕在手指上就可以，便可以轻松擦拭整个透镜表面。这样的折叠只需四步即可完成，如下图所示：很多物镜尺寸较小，若手指太大而无法擦拭透镜表面，只需用擦镜纸叠成三角形就可获得一个擦拭点。注意，务必