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        试剂配制,你不知道的事

        哪种浓度的酒精消毒效果最好?70% 酒精杀菌力最强,它能使蛋白质脱水和变性,在 3~5 分钟内杀死细菌。因此,它用于消毒和防腐,适用于皮肤和器械、塑料制品等的消毒。高浓度的酒精(95~100%)能引起菌体表层蛋白质凝固,形成保护层,使酒精分子不易透入,因此杀菌能力反而弱。试剂的等级有哪些?根据化学试剂的纯度,按杂质含量的多少可分为四级:一级试剂为优质纯试剂,通常用 G·R 表示;二级试剂为分析纯试剂,通常用 A·R 表示;三级试剂为化学纯试剂,通常用 C·R ...

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        如何把细胞养得更漂亮?

        不同的细胞,喜欢的环境是不一样的有一些细胞是数量多一点比较好生长,生长状态也比较好。这种一般是属于生长速度慢的细胞,譬如内皮细胞。而有一些细胞是数量少一点细胞状态会生长的比较好,譬如巨噬细胞和某些肿瘤细胞。巨噬细胞,生长速度非常快,贴壁速度很快,所以传代时就应该留很少量的细胞,这样细胞状态会比较好。并且它比较喜欢扎堆生长,而堆与堆之间是有空间的。如果长得连成一片,细胞形态就会差,老化的会比较多,对后期实验结果不好。 ...

        丁香实验推荐阅读
        论文写作:用完美的图展现你的实验数据

        好的实验数据图对于论文非常重要,如何用完美的图充分展现你的实验数据呢?除了看看级别高的杂志学习他们是如何制作排版的,掌握一些作图软件,下面的这些建议或许对你也有帮助。如何做免疫组化的图免疫组化做完后就要进行目的蛋白表达水平的评估,就是读片的过程。期间可以留意哪些染色具有代表性,可以作为文章中的图,用显微镜拍好后,接下来就是如何将这些代表性的图(如 weak,moderate,stong staining)合成一张图。将 ...

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        qPCR:从菜鸟到高手进阶宝典

        无 Ct 值出现检测荧光信号的步骤有误:一般 SG 法采用 72℃ 延伸时采集,Taqman 法则一般在退火结束时或延伸结束采集信号。引物或探针降解:可通过 PAGE 电泳检测其完整性。模板量不足:对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起。模板降解:避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况。Ct 值出现过晚(Ct 38)扩增效率低:反应条件不够优化。设计更好的引物或探针,改用三步法进行反应。适当降低退火温度,增加镁离子浓度等。PCR 各种反应成分的降解或加 ...

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        玩转 Protocol 之七种武器

        每当要搞从未做过的实验时,总会抓狂,到哪找 Protocol 呢?度娘似乎是万能,但度娘往往会把你带到「沟」里去。想必,这一直是困扰大家的问题。好吧,师兄今天将传授你七种武器,帮你找到心中的「它」。上古卷轴:实验工具书在上古时代,我们可以通过《分子克隆指南》、《蛋白质技术手册》、《蛋白质-蛋白质相互作用》、《Using Antibodies》、《动物细胞培养——基本技术指南》等等「上古卷轴」,找到我们想要的东西。不仅如此,在这些卷轴中,都会较为详 ...

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        5 年病毒包装经验总结

        在做病毒包装实验中,有科研工作者常遇到:用同样一个病毒载体系统进行病毒包装实验,为什么有人做的很好,次次成功。有人却是时常做不出来,稳定性很差,不是滴度低就是根本不出毒?腺病毒 or 慢病毒?慢病毒可以插入细胞基因组,稳定表达,持续时间长。 包装周期短(一般要两个月),感染效率相对于腺病毒要低很多。不能扩增,一次包装的病毒用完后如果再需要只能重新包装,成本高。一次包装所得到的的病毒滴度也相对较低(10 的 8 次方 pfu/ml),不大适合直接用 ...

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        你不一定知道的实验小技巧汇总

        大肠杆菌转化制备好了一批感受态,最好马上转化一种已知质粒。与此同时,取一点感受态接种到含抗性的固/液体培养基培养来做对照。这样第二天即可以知道这批感受态是否还有外源质粒,又可以知道这批感受态转化效率的高低。如果合格,那以后就可以放心使用。做克隆挑斑时,可以用牙签沾取试管里的培养菌液,在一块相应抗性的平板上点一下。标注清楚,培养时间稍长一点,待长成较大菌落后收取。以后需要哪一个菌,就在平板上挑取。这样既方便快捷,又可 ...

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        抗体选择经验

        随着生命科学的发展,围绕蛋白进行的研究越来越多,抗体试剂在实验中的重要性越来越举足轻重。面临着纷呈复杂的抗体试剂市场,如何选择到适合自己实验的抗体就变得尤为重要。一、关于特异性的选择:特异性的选择主要需要考虑四个方面:蛋白特异性、种属特异性、实验方法特异性、标记物的特异性。1、蛋白特异性:针对需要检测的蛋白查找抗体,几个细节要区分,重组表达的蛋白和内源性蛋白的检测,对抗体的要求是不一样的,注意查看抗体说明书的检测说 ...

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        别人眼中和我们自己眼中的科研

        经过多次实验别人眼中:哇,肯定做了不下上百次。好严谨。我们眼中:其实最多不会超过 3 次。科研女别人眼中:学历越高,丑女越多。并且还很土。我们眼中:不就羡慕我们美貌与智慧并存嘛。说真的,实验室美女不少。科研男别人眼中:书呆子,傻头傻脑。我们眼中:大部分上知天文,下知地理,学识渊博,幽默风趣。重大发现别人眼中:科学家好历害。我们眼中:每年这样的发现少说上千个,但是实际能应用的没几个。论文别人眼中:能发论文的,管他是不是 SCI,都很牛吧。我 ...

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        实验室里的潜在危险分析

        一、溶剂处理方面的潜在危险1. 溶剂无水处理前,一定要预处理对于低沸点的溶剂,如乙醚,正戊烷等一定要先用干燥剂预先干燥,然后再加入钠丝进行回流,并且加热不能过快过高。因为,一旦溶剂里面的含水量过大,那么生成氢气很剧烈的话,溶剂极易冲出体系,然后遇见明火或正在加热的电阻丝,发生爆炸。这一点在有机所是有先例的,当时的惨状是,爆炸的冲击波从三楼冲到顶楼,把通风装置炸的粉碎。包括对面实验室的整扇窗都被推倒。对于醚类溶剂,如果生产 ...

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        买细胞 你必须知道的事情

        细胞产品因为其特殊生物活性,在购买过程中受到诸多因素影响,产品质量极其容易波动,甚至出现意外情况,诸如细胞死亡,活性降低,不生长等,其中人为主观因素和环境客观因素均非常重要。需要客户和商家做好有效细致的沟通。一、购买前:1、明确产品需求细胞用户在购买细胞前,首先要非常清晰明确自己对产品的需求,细节如下:(1)细胞中文全称,包含物种来源,组织来源等。(不仔细看就会浪费自己的时间哦!)比如:SD 大鼠骨髓间充质干细胞,「SD」是品系 ...

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        学而时嘻之:国外博士生都过的啥日子?

        浏览英国卫报网站时,我看到该网站征集博士生照片,原汁原味向公众展示博士生平常过的都是咋样的日子。从网友上传的两百多张照片及其说明看,国外博士生的日子真是不咋的,一点不比国内滋润。奇怪的是,居然没有一张有图有真相抱怨环境太差、工资太低、老板太抠、奖励不公等等,这是为什么呢?我的一位美国朋友说,美国人选择读博士,那是因为他们往往是真正喜欢 Research。喜欢就不会抱怨读博士的清苦,因为清苦是做 Research 的本来状态。 ...

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        没有没有前途的专业 只有没有前途的人

        每年都会有人换个说法黑生物,还有人转行以后从此专注黑生物,更多的人是一边学一边抱怨。一起来看看赵思家学生物的心路历程,或许能给你些启发。一、初识生物一家人都从事能源、电子、电气研究,就我一人走上了医学研究的不归路,而且还是非主流的「不治病」领域。第一次接触生物是刚识字后,外公从上海给我带回来一本百科全书,里面有讲各种各样的自然、地理、工业知识。无意间发现心脏和水泵很像,当时被这种大自然和机械原理之间的联系给深深地震 ...

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        如何从实验菜鸟进阶为实验达人?

        刚进实验室做实验的时候,我不懂原理,不懂操作,看别人怎么做也跟着做。每天拼命做实验,没有结果还继续做。几个月过去,又回到原点。然后停下来思考:同样努力,别人稳步有结果,为何我还在原地?仔细观察对比后发现,原来别人忙碌的背后有深厚积累。破解这个奥妙后,我从零开始积累,一步一个脚印,在实验的道路上越走越踏实越走越自信。现在我把经验分享给大家,希望对你们有用。一、实验菜鸟要打好基础1. 实验前准备准备越充分,实验越顺利。前期的知识 ...

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        我们来谈谈移液情

        我们每天和移液器打交道,经常做各种反应,很多试剂会有颜色变化。闲暇的时候,还可以用手中的移液工具绘出最美最有趣的移液心情。花蝴蝶骏马奔腾图蓝色妖姬爱心娃娃绿豆七仔开心的萝卜爱你在心口难开喵酱,给我躲一下。小鹿我是离心管小白兔,白又白,两只耳朵竖起来。本文所有图片来自艾本德(Eppendorf),已得到对方授权使用。

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        如何写出一篇 IF 6.0 的高分论文?

        我的文章发表在 IF 6.0 的期刊,从写作到修回都是我一人包办,前后 3 轮共近 10 个月时间:投稿 2 个月修回,根据 Reviewer 意见修改再投又 2 个月,通知接受后 2 个月网上发表,再过 4 个月 print。本文单就投稿过程中我认为重要的一些问题做些提醒,希望对大家有用。文章初稿要精心组织编辑部一天接收到的网上投稿没有千儿也有八百,切记匆忙投稿。我老婆的老板就是要求快投稿,从高往下投,希望 Reviewer 来帮你写文章,结果不是太理想。Editor 和 Reviewer 一天审大量 ...

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        细数考研调剂潜规则

        考研已结束,此时可以说是几家欢乐几家忧。很多人面临调剂但又感到迷茫与不知所措,为此我整理了调剂经验给需要的人。调剂还是复读个人倾向于调剂,最好不要复读。因为时间不等人,社会的趋势也不让你复读。就算你能等,也要看看你的家人是否等得起。可以看看和你一届的当初信誓旦旦的喊着非要考博的还有几人?除非你有名校情节,认准一所学校非上不可。学校的差别好的学校平台确实好,发展前景也好,但其实只要不是那种很差的医学院,医疗环境差不 ...

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        生物学霸和你谈接吻

        自从有了情人节,我们对亲吻方式开始有无限遐想。在人类的活动指令系统中会有一个更加富有表现力的方式吗?当父母亲吻孩子的时候这代表着一种含义。但是当父母互相亲吻时意义就完全不同了。人们在问候一个完全陌生的人的时候会亲吻他们的脸颊,他们也用同样的方式对自己的情人表达亲密的感情。劫匪头目给予的是死亡之吻,天主教徒给予的是和平之吻,犹太人亲吻圣经的律法,不安的飞鸟亲吻大地,而且在极度生气的时候会要求一个亲吻后驱的吻。犹 ...

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        当科研狗遇上骚客

        才子李骥唱到「等待是一生中最初的苍老」——你是否在日复一日的等「带」中愁白了头,PCR 在等「带」,western blot 也在等「带」。有人说「相顾无言,唯有泪千行,料得日日断肠处,紫外下,无荧光。」我说「问君能有几多愁,恰似投稿不回头」……当科研屌丝遭遇文人骚客,当 protocol 遭遇诗情画意,于是有了下面这组科研狗的诗词。《枉凝眉》作者:思者行一个是技术奇葩,一个是室中菜鸟,若说没奇缘,今生偏又遇着它;若说有奇缘,如何条带终虚化?一个是水中月 ...

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        新手必读:免疫组化关键环节及其原理阐述

        酶免疫组化的关键环节1、标本固定:固定的目的是:防止标本从玻片上脱落;除去防碍抗原-抗体结合的类脂,使抗原抗体结合物易于获得良好的染色结果;固定的标本易于保存。2、脱水、石蜡包埋和制片:脱水用梯度乙醇(由低到高)充分脱水、对组织要完全浸蜡、切片时刀片要干净和锋利。否则,容易裂片和脱片等。3、脱蜡和水化:这是为了后面的抗体等试剂能够充分与组织中抗原等结合反应。脱蜡可以先 60℃ 20 min,然后立即二甲苯1-3 分别10 min,但当天制好 ...

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