细胞冻存的操作流程

以下方案推荐用于大多数细胞。根据细胞的类型，可能需要进一步优化。

1. 使用细胞特定的方案（机械分离或酶消化）制备细胞悬液后进行离心，以获得细胞沉淀。
2. 小心地吸出上清液，留下最小体积的培养基刚好覆盖细胞沉淀，以减少 PRIME-XV FreezIS 的稀释倍率。
3. 加入足够的预冷（2-8℃）PRIME-XV FreezIS 溶液，以获得建库所需的细胞密度。

注意：最佳密度可能因细胞类型不同而变化。

1. 轻轻吹打细胞沉淀以获得均匀的细胞悬液。
2. 将适量的细胞悬液分装至冻存管中。
3. 将细胞悬液在 2-8℃ 下孵育约 10 分钟。
4. 将样本温度降低到 -80℃。在降温过程中，大约在 -5℃ 时在每个样本中诱导形成冰核。请参照以下步骤。

• 对于大多数哺乳动物细胞系统，使用控制速率的冷冻装置（-1℃/分钟）或类似方法。当样品达到 -5℃ 时，使用液氮加速程序降温。
• 冷冻装置或异丙醇容器应预冷至 2-8℃。注意：处在 -80℃ 下 15～20 分钟后，通过轻弹或轻拍每个冻存管/样本容器来手动诱导成核，并放回至-80℃ 环境中。
• 当使用异丙醇容器时，最短冷冻时间（-80℃ 下）为 3 小时。

1. 冻存样本的储存。

• 将样本放入液氮温度（低于 -130℃）进行长期储存。
• 在 -80℃ 下的样本储存只建议用于短期储存（几周到几个月）。

1. 复苏程序。在 37℃ 水浴中快速解冻冻存管，轻轻旋转样品，直到所有可见的冰都融化。1 mL 样本在冻存管中的解冻时间为 2～3 分钟。注意：请不要让样本升温至高于冷藏温度（0-10℃）。从水浴中取出时，冻存管摸上去应该是凉的。
2. 立即将复苏的细胞和 PRIME-XV FreezIS 的混合物用预热的 20-37℃ 的适当的培养基进行稀释，稀释比例为 1:10（样本溶液：培养基）或更高。
3. 离心并除去上清液。
4. 重悬细胞并将其转移到适当的培养基中。如果解冻 PBMCs，则在细胞激活之前将其放在含有 IL-2 的培养基中过夜，以便解冻后恢复。