• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        🔥 划痕实验

        相关实验:细胞划痕实验

        别名:伤口愈合实验,Wound-Healing Assay

        最新修订时间:

        丁香实验推荐阅读

        合作专家 | 郭新容硕士

        临床医学 中南大学

        丁香实验推荐阅读

        审核专家 | 李娜硕士

        生理学 大连医科大学

        简介

        在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域,称为「划痕/伤口」,边缘的细胞会逐渐进入空白区域使「划痕/伤口」愈合。

        用途

        广泛用于可以观察药物、基因等外源因素对细胞迁移和修复的影响。

        材料与仪器

        marker 笔、6 孔板、20 µL 枪头、无菌 PBS、无血清或低血清(< 2%)的培养基、37 ℃,5% CO2 培养箱、显微镜

        步骤

        1、培养板划线标记

        用 marker 笔在 6 孔板背后画横线(用直尺比着),大约每隔 0.5~1 cm 一道,每孔至少横穿 5 条线。

        2、细胞铺板

        在孔内接种约 5-10×105 个细胞,根据具体细胞特性调整细胞数量,保证实验时细胞密度近 100% 单层细胞状态。

        3、细胞划线

        第二天用 20 uL 枪头(灭菌),垂直孔板背后的黑线划痕,使划痕与标记线相交。

        4、洗细胞

        使用无菌 PBS 洗细胞 2~3 次,去除划下的细胞,使留下的间隙肉眼即清晰可见,然后更换新鲜无血清或低血清(< 2%)的培养基。

        5、细胞培养与观察

        将细胞放入 37 ℃,5% CO2 培养箱中培养。然后在适当的时间点,如 0,6,12,24 小时后取出细胞,在显微镜下观察并拍照。

        6、数据分析

        使用 Image J 软件打开图片后,随机划取 6 至 8 条水平线,计算细胞间距离的均值。

        🔥 划痕实验

        注意事项

        1、细胞铺板根据细胞的生长快慢调整接种数量,原则为过夜后细胞能够长满,切记一定要铺匀。

        2、减少划痕距离的误差办法:不同孔之间最好使用同一只枪头;枪头要垂直,不能倾斜,划痕时可比着直尺;保持力度一致,尽量一次性划完。

        3、在用 PBS 缓冲液冲洗细胞时,注意贴壁慢慢加入,以免冲散单层贴壁细胞;为了避免细胞数量和状态受到影响,可用移液枪缓慢吸走。

        4、孔板选择:因为 6 孔板大小适中,可保证有相当距离的平直划痕,便于观察,故一般选择 6 孔板;当然若是需要高通量初筛时,也可以用 12 或 24 孔板。

        5、细胞的接种密度原则一般是过夜为 100% 融合,若过夜后细胞未 100% 融合,虽可以适当延长培养时间,但因细胞密度已经很大,所以细胞状态会逐渐变差,后续细胞可能不迁移而是凋亡。

        6、降低细胞增殖对迁移造成的假阳性结果的方法:

        ① 使用无血清或低血清培养基(< 2%)可降低细胞增殖对实验结果的影响;

        ② 一般认为 24 h 为细胞的一个周期,在选取合适的时间点(6,12,24 h)检测划痕宽度时,最好不要超过细胞一个周期的时间;

        ③ 如果要单纯考虑细胞迁移,可以先用丝裂霉素(1 μg/ml)处理 1 h,抑制细胞的分裂。

        7、确保拍照的观察点固定:按照 6 孔板背后画线的垂直方向划痕,可以形成若干交叉点,划痕一次与 5 条定位线相交,就有 10 个可固定监测点,以解决了前后观察时位置不固定的问题。

        来源:丁香实验

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序