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        肽特异性CD4+T细胞的诱导

        相关实验:Th细胞表位的鉴定

        最新修订时间:

        简介

        肽特异性 CD4T 细胞的诱导方法是指在体外用多肽进行刺激,制备效应细胞,以便后续进行 CTL 活性的检测。

        这是效应性细胞毒性 T 细胞的体外诱导方法的一种方法,除多肽刺激制备效应性细胞毒性 T 细胞方法外,还可用多肽孵育后 TAP 缺陷细胞刺激、多肽孵育后 DC 刺激法制备效应性细胞毒性 T 细胞。

        原理

        肽特异性 CD4T 细胞的诱导方法的基本原理是指在体外用多肽进行反复刺激,制备效应细胞,以便后续进行 CTL 活性的检测。

        材料与仪器

        器材:

        离心机、细胞培养箱等

        试剂:

        ① Ficoll-HyPaque
        ② 含血清的培养基
        ③ 无血清培养基
        ④ 含 5% FBS 的 PBS
        ⑤ 多肽或 APC
        ⑥ 丝裂霉素 C

        步骤

        肽特异性 CD4T 细胞的诱导方法的基本流程如下:

        1.新鲜采集的外周血采用 Ficoll-Hypaque 密度梯度离心法分离、获得 PBMC。PBMC 用含 5% FBS 的 PBS 洗涤 3 次后,重悬于含血清的培养基,培养。或进一步分离、获得 CD4T 细胞,培养。

        2.用无血清培养基洗涤分离、获得的 PBMC 或 DC,用无血清培养基重悬细胞后,加入 10~20 μg/ml 多肽,37 ℃ 孵育 2 小时。无血清培养基洗涤后,y 射线照射或用丝裂霉素 C 处理,用作 APC。

        3.分离、培养的 PBMC 或 CD4T 细胞用 2~20 μg/ml 多肽或 APC 刺激。1 周后,更换一半培养基,按 APC 与 PBMC3:1~1:3 的比例加入 APC 进行再次刺激。反复共刺激 2~3 个循环,每个循环约 1 周。

        *注:这里的比例是指 APC 与 PBMC 的比例从 3:1 开始,逐渐增加 PBMC 的比例,至 APC 与 PBMC 的比例为 1:3,以下同。

        4.再次刺激后第 2 天,加入 10~120 IU/ml IL-2。每 3 天补充一次 IL-2。

        5.最后一次刺激终止后,测定细胞增殖情况、检测细胞因子释放。

        来源:丁香实验

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