• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        直接免疫荧光染色法标记细胞膜表面分子

        相关实验:细胞膜表面分子免疫标记

        最新修订时间:

        简介

        直接免疫荧光染色法是荧光染色最简单、最基本的方法。

        原理

        直接免疫荧光染色法的基本过程可分为如下几步:

        (1) 取两支流式专用样品管分别标记为同型对照管和样品管。将 100 μl 细胞悬液加入流式专用样品管中 (细胞悬液浓度为 1×104 /μl)。
        注意:为了保证实验结果可靠准确,实验中一定要制备同型对照管。若釆用多色荧光标记,注意荧光干扰,必要时要制备补偿管。

        (2) 在同型对照管中加入荧光素标记同型对照抗体作为同型对照,在样品管中加入荧光素标记抗体作为待检样品,混匀 (试剂的用量根据试剂说明书)。
        注意:
        ① 若样品制备好但不能马上检测,最好 4 ℃ 避光保存。
        ② 加入荧光素标记的抗体前,要用羊血清封闭待检测细胞表面的 Fc 受体。
        (3) 4 ℃ 避光孵育 30 min,加入细胞洗液 2 ml,1000 r/min 离心 5 min,反复洗涤 2 次。
        (4) 弃上清,加入固定液 500 μl,混匀。
        (5) 上流式细胞仪检测与分析。

        材料与仪器

        器材:
        流式细胞仪。
        试剂:
        ① 荧光标记的特异性单克隆抗体及同型对照抗体 ;
        ② 细胞洗液。含 2% BSA、0.2% NaN3 的 PBS,固定液 (1% 多聚甲醛 PBS,pH7.2)。
        耗材:
        流式专用样品管、离心机、玻璃管

        步骤

        直接免疫荧光染色法的基本过程可分为如下几步:

        (1) 取两支流式专用样品管分别标记为同型对照管和样品管。将 100 μl 细胞悬液加入流式专用样品管中 (细胞悬液浓度为 1×104 /μl)。
        注意:为了保证实验结果可靠准确,实验中一定要制备同型对照管。若釆用多色荧光标记,注意荧光干扰,必要时要制备补偿管。

        (2) 在同型对照管中加入荧光素标记同型对照抗体作为同型对照,在样品管中加入荧光素标记抗体作为待检样品,混匀 (试剂的用量根据试剂说明书)。
        注意:
        ① 若样品制备好但不能马上检测,最好 4 ℃ 避光保存。
        ② 加入荧光素标记的抗体前,要用羊血清封闭待检测细胞表面的 Fc 受体。
        (3) 4 ℃ 避光孵育 30 min,加入细胞洗液 2 ml,1000 r/min 离心 5 min,反复洗涤 2 次。
        (4) 弃上清,加入固定液 500 μl,混匀。
        (5) 上流式细胞仪检测与分析。

        来源:丁香实验

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序