• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        胚胎成纤维细胞(MEFs)的制备

        相关实验:大鼠ES细胞技术

        最新修订时间:

        简介

        胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)是指从桑椹胚或附植前囊胚内细胞团分离的一种多能性干细胞,是最经典的多能性干细胞,它位于个体发育的顶端,具有发育的全能性,能够分化为组成机体的所有类型的细胞,进而形成机体的任何组织和器官,并具发育成完整个体的能力。

        材料与仪器

        器材:

        ① 无菌手术器械
        ② 显微镜
        ② 注射器
        ③ 培养箱、培养皿

        试剂:

        ① 鼠
        ② trypsin/EDTA
        ③ MEF 培养基培养液
        ④ PBS、麻醉剂、以 70% 乙醇等

        步骤

        胚胎成纤维细胞(MEFs)的制备的基本过程为:

        1) 将见栓 12.5~13.5 天的孕鼠脱颈处死,以 70% 乙醇浸泡 3~5 分钟。

        2) 将孕鼠放入超净工作台中,用无菌的眼科剪剖开腹部,取出子宫角,在盛有 70% 乙醇的培养皿中简单冲洗,迅速放入含有 20 ml PBS 的 100 mm 培养皿中洗涤 3 遍。

        3) 用无菌的眼科镊子将胚胎从子宫角中取出,放入盛有 PBS 的培养皿中,洗去血渍。去除胎鼠的头、四肢及内脏,然后将胚胎分别转移至 35 mm 的培养皿中,用无菌的眼科剪剪碎胚胎。

        4) 加入 0.5 ml 0.25% 的 trypsin/EDTA,并将组织块转移至 1.5 ml 离心管,在 37 ℃ 培养箱中放置消化 15 分钟,使得组织有效分解,立即加入 0.5 ml MEF 培养基终止胰酶消化。

        5) 用枪头吹散组织块,然后将上清液及组织块转移至 100 mm 培养皿中,每个皿中添加 7 ml 培养基,充分混匀细胞,37 ℃,5% CO2 培养过夜。

        6) 第二天更换培养液,去除没有贴壁的细胞及组织块。待细胞长至 90% 汇合时,MEFs 可以冻存,记为 P1 代,或者可以 1:3 传至 3 个 100 mm 培养皿,也可以用丝裂霉素 C 处理做饲养层细胞。

        来源:丁香实验

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序