切片观察实验

切片观察实验的基本原理是：

1．胃癌

人类胃癌或结肠癌在病理上有明确的分型标准，如胃癌大体形态方面早期的 Borrmann 分型，改良的 Vienna 分型，组织学上 Lauren 分型，WHO 分型等。小鼠疾病模型并没有像人类一样明确的分型标准，通常只根据组织学形态分析定义到与人类最相似的某种类型当中。小鼠的胃分成从形态上有明显区别的非腺性前胃和腺性后胃两部分。从病理切片 HE 染色结果上可以清楚地区分与人类病理发展过程相似的从局灶细胞增生到弥漫性鳞状细胞癌的发生过程（图 8-3-1）。

2．肠道炎症、癌症

对于小鼠肠炎引起的大体表型，可以通过肠组织的病理评分统计其严重程度（表 8-3-2）。

一般小鼠小肠癌症病例较少，而炎症和息肉的生成相对普遍。在肉眼观察到肠道息肉的基础上，可以通过肠道瑞士卷全肠切片确定炎症的发生位置。

切片观察实验的基本过程可分为如下几步，以肠道瑞士卷全肠切片为例：

A 小鼠准备：每组实验（如不同基因型或给药组）小鼠数量不得少于 6 只，对照组必须是同年龄、同性别的小鼠。

B 处死小鼠，分离肠管，用 1 x PBS 冲净肠管的排泄物/消化物残渣。操作尽量小心，防止因病变韧性变差的肠壁破裂、息肉/肿瘤从管壁的脱落。

C 剖开肠管，黏膜层朝上，平铺滤纸上，以 4% PFA 固定约 3 小时。

D 体视镜在 10 x 视野下检测息肉数目及直径。

E 固定后的肠管，卷成同心环状（Swiss roll method），脱水，包埋，切片后 HE 染色，免疫组化/免疫荧光染色以进行组织学检查。

F 统计分析：肿瘤发病率-每组有肠道肿瘤小鼠的只数；肿瘤的多发性一每只小鼠平均息肉数目；肿瘤大小一息肉平均直径。单因素方差分析，P < 0.05 认为具有显著性差异。结果示例如图 8-3-2 和图 8-3-3 所示。