• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        组织块法原代培养实验

        相关实验:细胞的原代培养实验

        最新修订时间:

        简介

        组织块法原代培养实验是在对一些来源有限、数量较少的组织进行原代培养时最常用的原代细胞培养方法。

        原理

        组织块法原代培养的基本原理是将将刚离体的、有旺盛生长活力的组织剪成小块,接种于培养瓶中,新生的细胞大约 24 h 后可从贴壁的组织块四周游出并生长。


        利用此法进行的原代培养,操作过程简便、易行,培养的细胞较易存活。

        材料与仪器

        器材:

        ① 大鼠

        ② 眼科剪、眼科镊

        ③ 培养皿、培养瓶

        ④ 弯头吸管

        ⑤ DMEM 培养基

        试剂:

        ① 75% 乙醇

        ② D-Hanks 液

        步骤

        组织块法原代培养实验的基本过程可分为以下几步:(以新生大鼠肝细胞的原代培养为例)

        A. 用 75% 乙醇棉球反复擦拭新生大鼠全身 3 遍。

        B. 将大鼠移入超净工作台后,再用 75% 乙醇擦拭 1 次。

        C. 处死大鼠(断头法),用眼科剪打开腹腔,取出肝组织,置于培养皿中。

        D. 用 D-Hanks 液反复冲洗肝组织 3 遍,去除血细胞。

        E. 为避免杂细胞的污染,需用眼科镊将肝组织块上所附的结缔组织尽可能去除。

        F. 将肝组织移入一新的培养皿中,滴 0.5 mL 培养基于肝组织上,用眼科剪将其剪成 1 mm3 左右的小块,同时用眼科镊将其彼此分开。

        G. 用弯头吸管将剪碎的肝组织块吸起,移入培养瓶底部。

        H. 用弯头吸管头移动肝组织块,使其均匀分布于培养瓶底部,小块间距控制在 0.5 cm 左右,数量为 15~20 块/培养瓶(25 mL)。

        I. 吸取少量培养基,沿培养瓶颈缓缓滴入,培养基的量以恰好能浸润组织块底部、但不会使组织块漂浮为佳。

        J. 将培养瓶轻轻放入培养箱中培养。

        K. 24 h 后,可观察到有少量细胞从组织块周围游离而出,视需要补以少量培养基。

        注意事项

        1. D-Hanks 液对肝组织的冲洗要充分,尽量去除血细胞,避免其溶血后对肝细胞的生长产生影响。

        2. 组织块的体积应控制在 1 mm3 左右,这样其中心部位的细胞才可获得充足的养分。体积过大的组织块其中心部位细胞常会因营养不足而发生死亡、溶解,由此会对周围细胞的生长产生影响。

        3. 培养瓶中组织块摆放的密度不能过大,否则细胞将会因为营养不足而活性不佳。此外,为了避免组织块漂浮、不贴壁,第一次加入培养基的量要少,而在移动和观察细胞时,动作也要轻,因为培养基的振荡也会影响组织块的贴壁。

        4. 由于原代培养过程较长,因此,应严格无菌操作,避免细菌、霉菌等的污染。

        来源:丁香实验

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序