合作专家 | 张荣钊博士
病原生物学 福建医科大学
材料与仪器
1. 材料
质粒 DNA、指数生长的真核细胞
PEI（聚乙烯亚胺）、1×HBS（pH = 7.4）
2. 配方
（1）PEI 储存液（100 μM）：称取 125 mg PEI 粉末溶解于 50 ml 1×HBS（pH = 7.4）中， 0.2 μm 滤膜过滤，储存于 4 ℃ 备用。
（2）1×HBS（pH = 7.4）： 将 8.76 g NaCl 溶解于 900 ml 超纯水，加入 20 ml 1 M 的HEPES，调 pH 值到 7.4，定容至 1 L，过滤（0.2 μm 滤膜）后储存于 4 ℃ 备用。
步骤
1、细胞分盘：通过胰酶消化收集细胞，用适当的完全培养基以 4×105 至 8×105 细胞/cm2 的密度平铺细胞于 60 mm 组织培养皿上（根据实验需要选择培养皿，使细胞贴壁后所占总面积达到培养皿面积的 70~90％）。
根据细胞贴壁情况于含 5％ CO2 的 37 ℃ 温箱中孵育 8~24 h，当细胞贴壁完全后即可开始转染。转染前换入 2 mL 预热的无血清培养基。
2、制备 PEI-DNA 混合物：以 60 mm 组织培养皿用 420 μL 反应总体积为例。
准备两支 1.5 mL 离心管，一管将质粒 DNA（总量 2~8 μg 为佳）加入 240 μL HBS 中，混匀。另一管中则用 HBS 将 100 μM 的 PEI 储存液稀释成 10 μM，充分混合。
然后取 180 μL 10 μM PEI 溶液加入含有 DNA 的 HBS 中，充分混匀后室温静置 20~30 min。最后将这 420 μL 的 PEI-DNA 混合液逐滴加入上述单层细胞的细胞培养基中，轻轻摇动平皿混匀，置于含 5％~7％ CO2 的 37 ℃ 温箱孵育。
注： 每次用 100 μM 的 PEI 储存液前都需要先将其充分混匀，保证所取的浓度一致。
3、培养 6~10 h 后更换为 37 ℃ 预热的含有血清的培养基，继续培养，16 h 左右可以观测到报告基因的表达。
来源：丁香实验
