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        聚焦时间的优化

        相关实验:一维固相 pH 梯度等电聚焦(IEF with IPG)

        最新修订时间:

        材料与仪器

        实验材料

        步骤

        理论上讲,要获得最好的图谱质量和重复性所需最佳时间是 IEF 分离达到稳定态所需的时间 。 若聚焦时间太短,会导致水平和垂直条纹,但要避免过度聚焦 。 虽然与经典 O'Farrell 法相比,不会导致蛋白质向阴极的迁移(阴极漂移),但却会因为活性水转运而导致过多水在 IPG 胶表面渗出(电渗), 会造成蛋白图谱变形。在胶条碱性端产生水平条纹以及蛋白质丢 失。 最佳聚焦时间必须根据不同蛋白质样品、蛋白上样量和所用特定 pH 范围及 IPG 胶条长度通过经验来确定。作为指导,表 3.1 和友 3.2 给出了针对一系列不同宽和窄 pH 范围 IPG 的优化保焦时间。

        聚焦时间的优化聚焦时间的优化聚焦时间的优化

        来源:丁香实验

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