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        加样

        相关实验:一维固相 pH 梯度等电聚焦(IEF with IPG)

        最新修订时间:

        材料与仪器

        实验材料

        步骤

        样品通常是加在放置在 IPG 胶阳极区或阴极区的硅橡胶框内或特殊加样杯内(图3. lg, h), 对不同类型的样品,最好的加样位置由经验值确定。最初电压卫限制在150V 30min, 从而使尽队多的样品进入加样杯,然后逐渐增加电压至3500 V 。运行时间决定了几个不同的因素,包括样品类型、蛋白上样量、 IPG 胶条长度及所用 pH 梯度 因为温度低时尿素可能会结晶,IEF 应当在 20℃运行,不同的温度下在 2-DE 图谱中 此蛋白质点们相对位置会发生变化。表 3.1 中列出了一些典型的运行条件。上面的加样方法会导致蛋白质沉淀,上样量较大时 (1mg 或更多)更为显著。将IPG胶条直接在含所分析样品泡胀液中泡胀可以克服这个问题。利用该方法可以成功分离很高样品量 (>10mg), 但可能存在高分子植蛋白,极碱性和膜蛋白的选择性丢失。最近研制成功的集成化设备 IPGphoc, 简化了一向 IPG IEF。该设备的特点是可以在加样品或不加样品时在持胶器 (stcip holdc,) 中对胶条进行重泡胀、选择上样量以及随后的 IEF,所有这些都可以在胶放入容器后设置桯序自动进行。仪器可以同时放12 个持胶器并配备珀尔帖,电了晶体管自动冷却装置,高达8000V 电压的程序化设置和l.5mA 的电源供应(图 3. li), 3.2 列出一些利用 IPG phor 的典型的 IPG IEF 运行条件。在重泡胀时加低电压可以提高高分子质量蛋白质的渗入效率。

        加样

        加样加样加样

        来源:丁香实验

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