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        冰冻片

        相关实验:用于 PCR 的模板 DNA 制备实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        1. 将 10 μl 冰冻切片直接放入含组织裂解液的离心管中。


        2. 无菌尖头刀片刮下,放入 300~900 μl 组织裂解液中,并加入 20 mg/ml 蛋白酶 K(PK)10~15 μl,封口膜封口,置 55℃ 3 h 以上。


        3. 其间用指轻弹离心管以利裂解。若有沉淀,再加入 5~10 μl 蛋白酶 K,直至无沉淀已澄清为止。


        4. 灭活蛋白酶 K 裂解液中含有蛋白酶 K,需放入沸水中 10 min 以灭活蛋白酶 K。


        5. 沉淀蛋白质按裂解液量的 1/3 加入蛋白质沉淀液(饱和乙酸钠)并混匀,14500r/mm 离心 15 min。此时,蛋白质沉于管底,DNA 溶解于上清液中。


        6. 析出 DNA 取上清液并加入等量冷异丙醇,充分混匀,新鲜标本此时可见 DNA 丝缠绕成团析出。若新鲜标本童太少或固定组织因 DNA 片段较小,无法用肉眼见到 DNA 成团析出,需 14500 r/min 再离心 10 min,一般 DNA 可见于管底。


        7. 洗涤溶解 DNA 倒去上清液,加入适量的 75% 冷乙醇,以洗掉残存的异丙醇和无机盐等物质,反复洗 2 遍。将管底含有 DNA 的离心管倒扣在清洁纸上,以挥发掉残留的乙醇和水。约 30 min 后,在 DNA 尚不太干时加入适量 TE 溶解 DNA。

        来源:丁香实验

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