显微镜直接计数法

1. 在白纸上画出 1 cm² 的方块，然后将玻片放在纸上。

2. 用 10 ul 的微量吸液器吸取混匀了的生牛乳样品，放在玻片 1 cm² 区域的中央。

3. 用接种针将牛乳涂匀，并涂满 1 cm² 的范围。

4. 使涂片于空气中慢慢干燥。将铁丝试管架放在沸水浴中，然后置已干燥的涂片于试管架上，用蒸汽热固定 5 min，待干。

5. 浸于美蓝染液缶内染色 2 min。

6. 取出玻片，用吸水纸吸去多余的染料，晾干。

7. 再用水缓缓冲洗，晾干。

8. 油镜下观察细菌数，共数 30～50 个视野。

9. 计算

每毫升的细菌总数＝平均每视野的细菌数×500 000

因为：

一般油镜的视野直径为 0.16 mm

一个视野的面积＝0.082 × 3.1416＝0.02 mm² ，化成 cm² ，视野面积＝0.02 × 0.01＝0.0002 cm² ，1 cm² 的视野数＝1.0 ÷ 0.0002＝5000

又因每 1 cm² 的牛乳量为 0.01 ml，即 1/100 ml，

则每一视野的牛乳量＝1/100×1/5 000＝1/500 000 ml

所以，一个视野中的 1 个细菌就代表 1 ml 牛乳中有 500 000 个细菌。因此 1 ml 牛乳中的细菌数＝一个视野的细菌数×500 000＝ 50 个视野的细菌数 ÷ 50×500 000