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        富尔根氏染色法

        最新修订时间:

        原理

        富尔根氏(Feulgen)染色法是根据席夫氏(Schiff)试剂进行的反应而建立的微生物拟核染色法。席夫氏试剂含有碱性复红和亚硫酸,碱性复红与亚硫酸结合后,失去醌式结构而变为无色。当 DNA 经酸作用而生成的醛化合物与席夫氏试剂结合后,使醌式结构恢复,合成一种带紫红色的碱性复红衍生物。此染色法对 DNA 具有特异性。微生物细胞用此法染色后,可在普通光学显微镜下原位观察到细胞内拟核的形态和位置。

        富尔根氏染色法主要分两步:

        1. 将细胞用 1 mol/L HCI 温和水解,使 DNA 中的嘌呤碱与戊糖分开,放出戊糖的醛基;

        2. 放出的戊糖醛基与席夫氏试剂作用后呈紫红色。

        材料与仪器

        步骤

        1 取培养 8~10 h 的酿酒酵母涂片,室温下风干。

        2. 将涂片置于盛有 2% 锇酸的蒸气瓶口上,用锇酸蒸气固定 5 min,然后放入加热至 60 ℃ 的 Schandium 固定液中 10 min。

        3. 用水冲洗固定后的标本,然后放在 60 ℃ 1 mol/L HCl 中水解 8 min,水洗。

        4. 用席夫氏试剂作用 30~40 min。

        5. 由席夫氏试剂中取出放在亚硫酸水溶液中洗 5 min。

        6. 由亚硫酸水溶液中取出水洗,干燥后,用油镜观察。

        来源:丁香实验

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