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        简单染色法

        相关实验:细菌简单染色实验

        最新修订时间:

        原理

        常用碱性染料进行简单染色,这是因为:在中性、碱性或弱酸性溶液中,细菌细胞通常带负电荷,而碱性染料在电离时,其分子的染色部分带正电荷(酸性染料电离时,其分子的染色部分带正电荷)。因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色。经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比,在显微镜下更易于识别,常用作简单染色的染料有:美蓝、结晶紫、碱性复红等。

        当细菌分解糖类产酸使培养基 pH 下降时,细菌所带正电荷增加,此时可用伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料染色。

        材料与仪器

        步骤

        1. 涂片

        取两块载玻片,各滴一小滴(或用接种环挑取 1~2 环)生理盐水(或蒸馏水)于玻片中央,用接环以无菌操作(图 IV-1)分别从枯草芽泡杆菌和藤黄微球菌斜面上挑取少许菌苔于水滴中,混匀井涂成薄膜。若用菌悬液(或液体培养物)涂片可用接种环挑取 2~3 环直接涂于载玻片上。


        2. 干燥

        室温自然干燥。


        3. 固定

        涂面朝上,通过火焰 2~3 次。

        此操作过程称热固定,其目的是使细胞质凝固,以固定细胞形态。并使之牢固附着在载玻片上。


        4. 染色

        将玻片平放于玻片搁架上,滴加染液于涂片上(染液刚好覆盖涂片薄膜为宜)。吕氏碱性美蓝染色 1~2 min,石炭酸复红(或草酸铵结晶紫)染色约 1 min。


        5. 水洗

        倒去染液。用自来水冲洗,直至涂片上流下的水无色为止。


        6. 干燥

        自然干燥,或用电吹风吹干,也可用吸水纸吸干。


        7. 镜检

        涂片干后镜检。

        注意事项

        1. 载玻片要洁净无油斑,滴生理盐水和取菌不宜过多,涂片要涂抹均匀。不宜过厚。

        2. 热固定温度不宜过高(以玻片背面不烫手为宜),否剿会改变甚至破坏细胞形态。

        3. 水洗时不要直接冲洗涂面,而应使水从载玻片的一端流下。水流不宜过急、过大,以免涂片薄膜脱落。

        4. 涂片必须完全干燥后才能用油镜观察。

        来源:丁香实验

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