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        三氯醋酸沉淀法

        相关实验:用酸沉淀法浓缩蛋白质实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        1. 在 1ml 样品中至少要含有 5mg 蛋白质。加 100 ul 100% 的三氯醋酸(TCA),混匀;


        2. 将蛋白质在冰浴中沉淀 30 min (或在冷冻箱内放置 15 min );


        3. 10 000 ×g 离心 5 min;


        4. 弃去上清并用吸管吸净残留液;


        5. 将沉淀再悬浮于50~100% 0.1N NaOH 溶液,混匀。

        注意事项

        1. 用 TCA 沉淀蛋白质,所需最低的蛋白质浓度是 5 ug/ml。


        2. 有时需要用 10% TCA 或乙醇-乙醚(1:1)洗涤 TCA 沉淀的蛋白质,以除去 TCA。


        3. 第 5 步不用 NaOH 溶液再悬浮 TCA 沉淀,而是用乙醇-乙醚(1:1 )洗涤 TCA 沉淀 ,并用缓冲液再悬浮沉淀,可能更易操作。


        4. 脱氧胆酸盐三氯醋酸(DOC-TCA)沉淀法是 TCA 沉淀法的一种变通形式,它可用于浓度 为 1 ug/ml 以下的蛋白质浓缩,该法使用范围更广。


        1 ml 样品加 0.1 ml 0.15% DOC。


        混匀并在室温下放置 10 min。


        加 50 ul 100% TCA,混匀并在 10 000×g 离心 5 min。


        DOC-TCA 沉淀反应不能在 SDS 存在的条件下进行。

        来源:丁香实验

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